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Identification of an endogenous AhR ligand and charcetrization of its mode of action

内源性 AhR 配体的鉴定及其作用模式的表征

基本信息

批准号：
22K19402
负责人：
成宮周
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Aryl hydrocarbon receptor (AhR)は、dioxinやbenzpyreneなど芳香族炭化水素の受容体で、これらで活性化され、核に転移、チトクローム P450 などを誘導してこれらの代謝を促進する。AhRの働きは、dioxinの毒性発揮、benzopyreneの発がん性誘導、環境汚染物質による炎症惹起など生体に有害なことが多いが、これらはAhRの異物センサーとしての働きであり、遺伝子欠損マウスの解析からは、AhRが発生、細胞分化、抗炎症、免疫、生殖などに働くことが示されている。しかし、AhRがどのような内因性物質で活性化されこれらに働くのかは不明である。本研究の目的は、我々が培養ヒト表皮角化細胞（NHEK)の分化過程で見出した内因性のAhR活性化物質を同定し、その生理活性と発現メカニズムを解明することである。本年度は以下の研究を行った。1.チトクロームp450(CYP1A1)及び表皮角化細胞でAhR依存性に誘導されることが知られているfillagrin (FLG)の発現を指標にNHEK細胞を用いてAhR活性化物質を検出するassay系を確立した。２．上記を用いてNHEK細胞ライゼート及び培養上清のAhR活性化物質を検討し、細胞ライゼートのみならず培養上清でAhR活性化物質（CYP1A1及びFLG mRNA 誘導物質)を検出し、これがNHEK 培養にトリプトファン添加で増加することを確認した。また、各種阻害剤を用いることで、この活性がトリプトファンのキヌレニン経路によらないこと、また、IL-4添加と無関係であることを確認した。３. 量的に多い培養上清を用いて、活性をSepPAK C18で抽出、ついで、順相クロマト、逆相クロマトにかけ、活性がいくつかのピークに分かれること、それらの溶出位置を同定した。一部、質量分析にかけたが構造同定には至っていない。

Aryl hydrocarbon receptor (AhR), dioxin, benzpyrene, aromatic carbonized water, capacitive, activated, nuclear transfer, P450 lead, lead and promote. AhR antigens, dioxin toxins, benzopyrene antigens, environmental contaminants. Inflammation causes harmful infections in the body. It is harmful to the body. It does not affect the quality of the virus. It shows that the cell differentiation, anti-inflammatory, immune, and reproductive diseases are not known. The cell differentiation, anti-inflammatory, immune, and reproductive diseases show that the virus is sensitive. The cause of the disease is the activation of the internal cause, the activation of the AhR, the activation of the internal cause, the activation of the internal cause. The purpose of this study is to develop the process of differentiation of epidermal keratosis cells (NHEK) in order to determine the endogenous AhR activating substance and physiological activity. The following studies will be conducted this year. 1. The epidermis keratosis cell (P450) and epidermis keratinization cell (AhR) are dependent on AhR. The epidermis keratosis cell (FLG) is known to be sensitive to NHEK (FLG). Use the AhR activator to confirm that the assay system is stable. 2. In the previous note, you can use the supernatant of NHEK activating substances (CYP1A1 and FLG mRNA products), the supernatant of AhR activating substances, and the supernatants of AhR activating substances (CYP1A1 and FLG mRNA active substances) to make sure that they are not activated. In the previous note, you can use the supernatant of AhR activating substances (CYP1A1 and PUBG) to make sure that you can add more information to make sure that you want to do so. All kinds of blocking devices are used to confirm the quality of the products. Please do not send any information on the route. Do not use any information to confirm the performance of the device. Please do not use the IL-4. 3. The amount of the supernatant was extracted with SepPAK C18, the phase was extracted, the reverse phase was isolated, the active phase was separated, and the dissolution position was determined. First, quantitative analysis is required to determine the accuracy of the system.