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Identification of an endogenous AhR ligand and charcetrization of its mode of action

内源性 AhR 配体的鉴定及其作用模式的表征

基本信息

批准号：
22K19402
负责人：
成宮周
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Aryl hydrocarbon receptor (AhR)は、dioxinやbenzpyreneなど芳香族炭化水素の受容体で、これらで活性化され、核に転移、チトクローム P450 などを誘導してこれらの代謝を促進する。AhRの働きは、dioxinの毒性発揮、benzopyreneの発がん性誘導、環境汚染物質による炎症惹起など生体に有害なことが多いが、これらはAhRの異物センサーとしての働きであり、遺伝子欠損マウスの解析からは、AhRが発生、細胞分化、抗炎症、免疫、生殖などに働くことが示されている。しかし、AhRがどのような内因性物質で活性化されこれらに働くのかは不明である。本研究の目的は、我々が培養ヒト表皮角化細胞（NHEK)の分化過程で見出した内因性のAhR活性化物質を同定し、その生理活性と発現メカニズムを解明することである。本年度は以下の研究を行った。1.チトクロームp450(CYP1A1)及び表皮角化細胞でAhR依存性に誘導されることが知られているfillagrin (FLG)の発現を指標にNHEK細胞を用いてAhR活性化物質を検出するassay系を確立した。２．上記を用いてNHEK細胞ライゼート及び培養上清のAhR活性化物質を検討し、細胞ライゼートのみならず培養上清でAhR活性化物質（CYP1A1及びFLG mRNA 誘導物質)を検出し、これがNHEK 培養にトリプトファン添加で増加することを確認した。また、各種阻害剤を用いることで、この活性がトリプトファンのキヌレニン経路によらないこと、また、IL-4添加と無関係であることを確認した。３. 量的に多い培養上清を用いて、活性をSepPAK C18で抽出、ついで、順相クロマト、逆相クロマトにかけ、活性がいくつかのピークに分かれること、それらの溶出位置を同定した。一部、質量分析にかけたが構造同定には至っていない。

Aryl hydrocarbon receptor (AhR) is a receptor for aromatic hydrocarbon, which is activated, transferred, and metabolized. AhR, dioxin toxicity, benzopyrene development, inflammatory induction, environmental pollutants, harmful organisms, AhR foreign body, anti-inflammatory, genetic damage, analysis, AhR development, cell differentiation, anti-inflammatory, immune, reproductive, etc. AhR is activated by endogenous substances. The aim of this study was to elucidate the differentiation process of cultured epidermal keratinocytes (NHEK), the regulation of endogenous AhR activators and the development of physiological activities. This year, the following research was conducted. 1. The AhR-dependent induction of p450(CYP1A1) and epidermal keratinocytes was detected by NHEK cells as an indicator of the production of filagrin (FLG). 2. The AhR-activating substances (CYP1A1 and FLG mRNA inducers) in culture supernatant of NHEK cells were detected and increased in culture supernatant of NHEK cells. All kinds of resistance agents are used in this way, and the activity of IL-4 is confirmed. 3. The amount of culture supernatant, activity, SepPAK C18, extraction, cis phase, reverse phase, activity, dissolution position are all determined. The first part, quality analysis, structure and determination.