Development of immunotherapy for advanced extramammary Paget's disease

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究は、申請者が世界で初めてcancer tissue-originated spheroid法によって確立した培養乳房外Paget病細胞を用いて、EMPDに対するγδT細胞療法の効果をin vitro, NOD/Scidマウスへの移植モデルで検討する。末梢血より単核球を分離し、14日間培養を行い、フローサイトメトリーにて4から5%程度のVδ2Vγ9T細胞を確認した。次にゾレドロネートによる刺激を加えて培養したところ、培養した単核球中の90%以上がVδ2Vγ9T細胞へ分化、増殖していることを確認した。ヒト末梢血由来Vδ2Vγ9T細胞の乳房外パジェット病に対する抗腫瘍効果を検討するため、乳房外パジェット病の腫瘍組織より分離、培養したCTOSを用いた基礎実験を行った。CTOSにin vitroで増殖させたVδ2Vγ9T細胞を共培養させ、CTOSの形態、大きさの変化を解析したが、対照群（T細胞共培養群）、Vδ2Vγ9T細胞共培養群ともにCTOS細胞が消失し、対照群との有意な変化は認められなかった。また、同様に血管肉腫の腫瘍細胞株であるISO-HASに対しVδ2Vγ9T細胞を共培養させ、抗腫瘍効果を検討した。対照群（T細胞共培養群）に対しVδ2Vγ9T細胞共培養群ではやや抗腫瘍効果がみられたが、有意差はみられなかった。次に、Vδ2Vγ9T細胞の細胞毒性をLDH assayを用いて数値的に評価するために、接着細胞であるISO-HASとの共培養実験も行った。時間による細胞毒性の違いを検討したところ、ISO-HASでは約半日経過した時点で細胞毒性が出てきていたが、Vδ2Vγ9T細胞共培養群は対照群（T細胞共培養群）と比較して細胞毒性が弱い結果となり、予想していた結果と反対の結果となった。