ヒト乳房外パジェット病におけるp53遺伝子の変異に関するPCR-SSCP解析

人乳房外佩吉特病p53基因突变的PCR-SSCP分析

• 批准号: 05857091
• 负责人: 山崎 自子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857091/
• 关键词: 乳房外パジェット病; 癌抑制遺伝子; p53; PCR-SSCP解析

当科にて切除された30例以上の乳房外パジェット病患者より得られた、ホルマリン固定パラフィン包埋組織を試料として用いた。まず、フェノール・クロロホルム抽出・エタノール沈澱法により、ゲノムDNAを抽出した。次に、得られたDNAを鋳型とし、p53遺伝子の異常が集中して認められるエクソン4から9と、それに隣接するイントロンを含む領域をはさむように数種類のプライマー対を設定して、PCRを行なった。この増幅されたDNA断片に対し、SSCP法で解析した。まず,p53遺伝子エクソン4内にある塩基配列多型について、ヘテロ接合性の消失の有無を検討したところ、腫瘍部においてヘテロ接合性の消失は認められなかった。また、p53遺伝子エクソン4から9の領域について腫瘍部DNA中に,点突然変異などの構造異常や正常アレルの欠失は認められなかった。しかしながら、今回検索した範囲以外のエクソンに構造異常が起こっている可能性は否定できない。また、実験の手技上、SSCP解析時に、高電圧・高電流の状態で長時間電気泳動を行なうため、プレートの充分な冷却を行なう必要があるが、原法で使用されているシロッコ・ファンが非売品のため、扇風機で代用せざるをえなかった。このため冷却が不充分となり、陽性コントロールを用いて繰返し同じ条件下で実験を行なったところ、再現性が悪い結果となった。ぜひ、冷却式電気泳動装置を購入し、検索するエクソンの範囲も拡大して、さらに実験を進めていきたいと考えている。

More than 30 cases of breast cancer were resected, and the embedded tissue samples were used. DNA extraction by precipitation method P53 gene abnormalities are concentrated in the following regions: P4, P5, P6, P7, P8, P9, P The DNA fragments were analyzed by SSCP method. The p53 gene was found in the p53 gene, and the p53 gene was found in the p53 gene. The p53 gene was found in the DNA of the tumor, and the site suddenly changed. The possibility of structural anomaly is negative. In the case of SSCP analysis, high voltage and high current state, long time electric swimming, sufficient cooling, etc., the original method is used for non-commercial products, fan substitutes, etc. The cooling is not sufficient, the positive is not sufficient, the negative is sufficient, the negative is sufficient, and the negative is sufficient. The cooling type electric drive device is purchased, tested and tested.