ヒト乳房外パジェット病におけるp53遺伝子の変更に関するPCR-SSCP

当科にて切除された30例以上の乳房外パジェット病患者より得られた、ホルマリン固定パラフィン包埋組織を試料として用いた。まず、フェノール・クロロホルム抽出・エタノール沈殿法により、ゲノムDNAを抽出した。次に、得られたDNAを鋳型とし、p53遺伝子の異常が集中して認められるエクソン4から9と、それに隣接するイントロンを含む領域をはさむように数種類のプライマー対を設定して、PCRを行なった。この増幅されたDNA断片に対し、SSCP法で解析した。まず、p53遺伝子エクソン4内にある塩基配列多型について、ヘテロ接合性の消失の有無を検討したところ、腫瘍部においてヘテロ接合性の消失は認められなかった。また、p53遺伝子エクソン4から9の領域について腫瘍部DNA中に、点突然変異などの構造異常や正常アレルの欠失は認められなかった。今回検索した範囲以外のエクソンもしくはイントロンに構造異常が起こっている可能性は否定できない。しかし、他の悪性腫瘍で集中してみられる範囲に変異を認めないことにより、ヒト乳房外パジェット病の発癌およびその進展様式において、p53遺伝子が単独で果たす役割はきわめて少ないと考えられた。

当科にて切除された30例以上の乳房外パジェット病患者より得られた、ホルマリン固定パラフィン包埋組織を試料として用いた。まず、フェノール・クロロホルム抽出・エタノール沈殿法により、ゲノムDNAを抽出した。次に、得られたDNAを鋳型とし、p53遺伝子の異常が集中して認められるエクソン4から9と、それに隣接するイントロンを含む領域をはさむように数種類のプライマー対を設定して、PCRを行なった。この増幅されたDNA断片に対し、SSCP法で解析した。まず、p53遺伝子エクソン4内にある塩基配列多型について、ヘテロ接合性の消失の有無を検討したところ、腫瘍部においてヘテロ接合性の消失は認められなかった。また、p53遺伝子エクソン4から9の領域について腫瘍部DNA中に、点突然変異などの構造異常や正常アレルの欠失は認められなかった。今回検索した範囲以外のエクソンもしくはイントロンに構造異常が起こっている可能性は否定できない。しかし、他の悪性腫瘍で集中してみられる範囲に変異を認めないことにより、ヒト乳房外パジェット病の発癌およびその進展様式において、p53遺伝子が単独で果たす役割はきわめて少ないと考えられた。