レチノイン酸によるマクロファージ・パイロトーシス制御機構

视黄酸控制巨噬细胞焦亡的机制

• 批准号: 21K08433
• 负责人: 平賀 寛人
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08433/
• 关键词: レチノイン酸; ビタミンA; マクロファージ; パイロトーシス; インフラマソーム

VADマウスでは腸炎モデル・感染モデルのいずれにおいても宿主抵抗性が減弱しており、ビタミンAがマクロファージのパイロトーシスに及ぼす影響と炎症性腸疾患の病因・病態に関与している可能性に着目し、本研究を進めている。当該年度に実施した研究の成果は下記の通りである。①VADマウスの作製：妊娠雌をビタミンA欠乏食（オリエンタルイースト社）で飼育、10週齢まで欠乏食を継続。対照群は通常餌で飼育したVitamin A-sufficient (VAS)マウスを使用。②DSS腸炎誘発：VAS・VADマウスに4% DSS（M.W. 5000, WAKO）自由飲水で腸炎を誘発。0・1・2日後にコラゲナーゼ法でLPMCを分離、LPS添加して培養、パイロトーシスを評価。③Salmonella typhimurium経口感染：S.typhimurium Χ3306株を1X108 CFU/0.2 mlに調整し、経口感染させる。感染0・1・2日後に脾臓を採取、パイロトーシス関連分子を解析。④CD11b+脾細胞分離・培養：VAS・VADマウスから脾臓を摘出、コラゲナーゼ処理・破砕・溶血をへて脾細胞を分離する。CD11b+脾細胞をマグネットビーズで標識し、AUTOMACS（Miltenyi Biotec社）で分離する。10% FBS RPMIで5X106 /mlに細胞浮遊液を調整し、対照群・LPS添加群（10 μg/ml）に分けて培養→パイロトーシスを解析（上清中IL-1b測定, LDH-releasing assay）。

VAD disease enteritis disease and infection disease The host's resistance is weakened The purpose of this study is to determine the cause and pathology of inflammatory bowel disease and its possible effects on inflammatory bowel disease. The results of the research carried out in that year will be recorded in the following document. ① VAD maize production: Pregnant female をビタミンA lacks food (オリエンタルイースト社) is raised, and 10 weeks old does not require food. Use Vitamin A-sufficient (VAS) for normal bait and feeding purposes. ②DSS enteritis-inducing disease: VAS・VAD Matrix 4% DSS (M.W. 5000, WAKO) can be used to induce enteritis with free drinking water. 0・1・2 days later, the LPMC was separated by the LPS method, cultured with LPS added, and evaluated using the LPS method. ③Salmonella typhimurium oral infection: S.typhimurium Χ3306 strain can be adjusted to 1X108 CFU/0.2 ml, and oral infection can be used. The spleen was collected 0, 1, and 2 days after infection, and the relevant molecules were analyzed using the パイロトーシス. ④Isolation and culture of CD11b+ splenocytes: VAS・VAD mascara extraction, コラゲナーゼ treatment, rupture, hemolysis, splenocyte isolation and isolation. CD11b+ splenocytes were identified and isolated using AUTOMACS (Miltenyi Biotec). The cell suspension was adjusted to 10% FBS RPMI 5