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レチノイン酸によるマクロファージ・パイロトーシス制御機構

视黄酸控制巨噬细胞焦亡的机制

基本信息

批准号：
21K08433
负责人：
平賀寛人
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

VADマウスでは腸炎モデル・感染モデルのいずれにおいても宿主抵抗性が減弱しており、ビタミンAがマクロファージのパイロトーシスに及ぼす影響と炎症性腸疾患の病因・病態に関与している可能性に着目し、本研究を進めている。当該年度に実施した研究の成果は下記の通りである。①VADマウスの作製：妊娠雌をビタミンA欠乏食（オリエンタルイースト社）で飼育、10週齢まで欠乏食を継続。対照群は通常餌で飼育したVitamin A-sufficient (VAS)マウスを使用。②DSS腸炎誘発：VAS・VADマウスに4% DSS（M.W. 5000, WAKO）自由飲水で腸炎を誘発。0・1・2日後にコラゲナーゼ法でLPMCを分離、LPS添加して培養、パイロトーシスを評価。③Salmonella typhimurium経口感染：S.typhimurium Χ3306株を1X108 CFU/0.2 mlに調整し、経口感染させる。感染0・1・2日後に脾臓を採取、パイロトーシス関連分子を解析。④CD11b+脾細胞分離・培養：VAS・VADマウスから脾臓を摘出、コラゲナーゼ処理・破砕・溶血をへて脾細胞を分離する。CD11b+脾細胞をマグネットビーズで標識し、AUTOMACS（Miltenyi Biotec社）で分離する。10% FBS RPMIで5X106 /mlに細胞浮遊液を調整し、対照群・LPS添加群（10 μg/ml）に分けて培養→パイロトーシスを解析（上清中IL-1b測定, LDH-releasing assay）。

VAD is the cause of inflammatory bowel disease, the pathogenesis of infection, and the possibility of host resistance weakening. The results of the research carried out during the year are recorded below. (1) VAD system: pregnant female is short of food, 10 weeks old is short of food Vitamin A-sufficient (VAS) is usually used for breeding. DSS: VAS·VAD·4% DSS (M.W.) 5000, WAKO) ad libitum water. 0·1·2 days later, LPMC isolation, LPS addition, culture, and evaluation were performed. Salmonella typhimurium infection: S.typhimurium X3306 strain 1 X 108 CFU/0.2 ml 0·1·2 days after infection, the relevant molecules were analyzed.④ CD11b + spleen cell isolation and culture: VAS, VAD, spleen extraction, treatment, hemolysis, spleen cell isolation. CD11b + splenocytes were identified and isolated by AUTOMACS (Miltenyi Biotec). 10% FBS RPMI 5X106 /ml for cell suspension adjustment, control group, LPS addition group (10 μg/ml) for culture → analysis of cell suspension (IL-1b determination in supernatant, LDH-releasing assay)