新規病原体核酸検査に用いる汎用的精度管理標品の迅速な作成を検証に資する研究

有助于验证快速创建用于新型病原体核酸检测的通用质量控制标本的研究

• 批准号: 21K08497
• 负责人: 石井 良和
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08497/
• 关键词: 病原体核酸検査; 精度管理; レンチウイルス; SARS-CoV-2; RT-qPCR; dPCR; 陽性コントロール; フルプロセスコントロール

PCR検査に代表される病原体核酸検査において、その精度管理は重要な課題である。精度管理すべき検査工程として、核酸抽出から試薬混合調製までの検査前プロセス、DNA増幅(標的がRNAの場合は逆転写工程を含む) から検出までの検査プロセス、結果解釈から報告までの検査後プロセスがある。検査前プロセスから検査後プロセスまでの全工程を精度管理するには、標的核酸が対象病原体と同等の膜などに封入された状態のフルプロセスコントロール試料が必要である。本研究では、SARS-CoV-2のPCR検査をモデルとして、任意のRNA塩基配列を組み込んでパーティクルに封入できる市販の組換えレンチウイルス作成キット (タカラバイオ) を用いたフルプロセスコントロール試料作製方法を検証する。この方法は、新たに流行する病原体の病原体核酸検査の迅速なフルプロセスコントロール試料作製への応用が期待される。フルプロセスコントロールに組み込む標的は、国立感染症研究所および米国Center for Disease Control and Preventionが公表するreverse-transcription (RT)-PCRの標的に加え、本邦で利用可能なRT-qPCR検査キットの標的とされている、Orf1b, S, およびE遺伝子の一部を直列につなぎ合わせた配列を、人工遺伝子合成サービスに委託して入手した。これをレンチウイルスベクタープラスミド pLVSINに挿入し、Lentiviral High Titer Packaging MixとともにLenti-X 293T細胞にコトランスフェクションすることにより、任意の配列をRNAゲノムに有する組換えレンチウイルスを取得した。今後、組換えレンチウイルスの安定性を確認した後、外部精度管理における精度管理試料としての妥当性を確認する。

PCR 検 check に representative さ れ る pathogen nucleic acid 検 check に お い て, そ は の precision management important topic な で あ る. Precision management す べ き 検 check engineering と し て, nucleic acid extraction か ら try 薬 hybrid modulation ま で の 検 check before プ ロ セ ス, rights of DNA (mark が RNA の occasions は inverse planning write engineering を む) か ら 検 out ま で の 検 check プ ロ セ ス and results 釈 か ら report ま で の 検 check after プ ロ セ ス が あ る. 検 check before プ ロ セ ス か ら 検 check after プ ロ セ ス ま で の engineering を precision management す る に は, target nucleic acid が as pathogens seaborne と equal の membrane な ど に さ sealed れ た state の フ ル プ ロ セ ス コ ン ト ロ ー ル sample が necessary で あ る. This study で は, SARS - CoV - 2 の PCR 検 を モ デ ル と し て, arbitrary の RNA salt base with column group を み 込 ん で パ ー テ ィ ク ル に で sealed き る city vendor の group in え レ ン チ ウ イ ル ス made キ ッ ト (タ カ ラ バ イ オ) を with い た フ ル プ ロ セ ス コ ン ト ロ ー ル sample method for system を 検 card す る. こ の way は, new た に popular す る pathogens の pathogen nucleic acid 検 check の quickly な フ ル プ ロ セ ス コ ン ト ロ ー ル sample for making へ の 応 with が expect さ れ る. Youdaoplaceholder0 フ プロセスコ プロセスコ トロ トロ トロ に に group み込む target する, national Institute of Infectious diseases および us Center for Disease Control and Preventionが public table するreverse-transcription (RT) - PCR の mark に え, state で may use な RT - qPCR 検 check キ ッ ト の mark と さ れ て い る, Orf1b, S, お よ び E heritage 伝 son の a を inline に つ な ぎ close わ せ た match column を, artificial but 伝 synthetic サ ー ビ ス に entrust し て of し た. こ れ を レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー プ ラ ス ミ ド pLVSIN に scions into し, Lentiviral High Titer Packaging Mix と と も に Lenti - X 293 t cells に コ ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン す る こ と に よ り, arbitrary の match column を RNA ゲ ノ ム に have す る group in え レ ン チ ウ イ ル ス を obtain し た. In the future, group in え レ ン チ ウ イ ル ス の stability を confirm し た after management, external precision に お け る precision management sample と し て の justice を confirm す る.