Analysis of medaka intestinal atresia mutant

青鳉肠闭锁突变体分析

• 批准号: 21K08601
• 负责人: 小林 大介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08601/
• 关键词: 腸管閉鎖; モデル疾患生物; メダカ; アクトミオシン; モデル疾患動物

本研究ではアクトミオシンの制御の異常により胚発生時に腸管閉鎖を生じるメダカの突然変異体を用い、腸管閉鎖症の発症機構の一端を明らかにすることを目的としている。本年度は（１）腸管閉鎖部位における遺伝子発現変動のシングルセルレベルでの解析、（２）腸管閉鎖を生じる際のライブイメージング、のための予備実験を行った。（１）腸管閉鎖に先行して起こる現象として応募者が捉えている最も初期の兆候は、stage25胚における腸管閉鎖部位での異常なアクチンの集積である。この時期に腸管で生じている現象を遺伝子発現のレベルから捉えるために、この時期の腸管を単離しシングルセルレベルでの遺伝子発現解析を行い、変異体における発現変動を明らかにすることを目的としている。しかしながら、この時期の胚はライブの状態では変異体の識別を行うことができず、何らかの手法で変異体を識別する方法が必要である。そのために、組織特異的に蛍光タンパクを発現するコンストラクトを原因遺伝子であるmypt1にノックインし、遺伝子の機能破壊が行われたアリルを持つ個体で組織特異的な蛍光タンパク質の発現が観察される系統の作成を試みた。これまでに心臓特異的にmCherryを発現するノックイン系統を作成している。本年度はこれに加えて心臓にGFPを発現するノックイン系統を作成することを試みた。両ノックイン系統を用いることにより、GFP/mCherryの両者が発現する胚を変異体ホモの個体を判別できることが期待される。（２）これまでに作成したLifeact-mCherryのノックイン個体では、観察に十分な蛍光強度が得られなかったことから、新たにアクチンに結合するnanobodyを利用したコンストラクトを作成し、内在性アクチンの局在を可視化できるか否かについて検討した。

The purpose of this study is to investigate the abnormal control of intestinal atresia during embryonic development, the sudden change of intestinal atresia during embryonic development, and the development of one end of intestinal atresia. This year, we carried out (1) analysis of the occurrence of intestinal atresia and (2) preparation of intestinal atresia. (1) The phenomenon of intestinal atresia begins first and the symptoms of intestinal atresia begin at the earliest stage. The abnormal accumulation of intestinal atresia occurs at stage25. During this period of time, the phenomenon of intestinal tract formation, the occurrence of gene, the occurrence, the occurrence, the It is necessary to identify the foreign language in the state of the embryo in this period. The system for the detection of tissue-specific light sources and their functions is designed to be able to detect the presence of tissue-specific light sources. This is the first time that a special mCherry has been created. This year, we will try to create a new system for you. The GFP/mCherry system is used to identify individuals. (2) The Lifeact-mCherry is made up of individuals, observation points, light intensity points, new information points, combination points, nanobodies, utilization points, creation points, intrinsic information points, visualization points, and investigation points.