膵がん治療におけるO-GlcNAc分解酵素OGAの重要性とその分子機構の解明

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本研究は、膵がん治療におけるO-GlcNAc分解酵素OGA経路の重要性とその分子機構の解明を目指すものである。本年度は、KRAS変異陽性・陰性の膵がん細胞株を利用し、OGA阻害による細胞増殖能が抑制の確認と、メカニズムの策定を行なった。まず、KRAS変異陽性細胞２種類と、陰性細胞２種類を対象に、OGA阻害による細胞増殖能の抑制を確認するために、shRNAによるノックダウン、阻害薬 (PUGNAC) を用いOGA経路を阻害し、細胞増殖能を生細胞数測定、コロニー数測定で評価したところ、KRAS野生型細胞株でKRAS変異細胞株よりも顕著な細胞増殖能の低下を認めた。OGA阻害細胞を対象としたRNA-seq解析を実施し、OGA阻害による細胞増殖能、コロニー形成能抑制に関わる経路を抽出した。 また、O-GlcNAc抗体を用いた免疫共沈降法を用いて、OGA阻害細胞において細胞内タンパク質のO-GlcNAc修飾が増加することを確認した。現在、質量分析計を利用した、OGA阻害細胞株の網羅的O-GlcNAc修飾プロテオーム解析を実施している。さらに、OGA阻害による抗がん剤(5-FU)感受性への影響を検討し、現在オミックス解析を実施している。