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スキルス胃癌の微小環境構築・腹膜播種を阻止するためのレクチン含有細胞外小胞の開発

开发含凝集素的细胞外囊泡构建微环境并预防硬质胃癌腹膜播散

基本信息

批准号：
21K08722
负责人：
土田明子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
The Noguchi Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、高転移性胃癌細胞が分泌する細胞外小胞の性状および機能解析を行い、腹膜中皮細胞を標的化する際にガレクチン-4が関与するかを明らかにすることを目的とする。また、ガレクチン-4発現細胞とKO細胞が分泌する細胞外小胞を比較することで、腹膜転移を促進させるメカニズムの解明を目指す。当該年度は、まず各NUGC4細胞クローン株(wild株, Mock株, KO株, Rescue株2種)の細胞外小胞の精製しWestern Blottingによる特性解析を行った。各細胞外小胞の重要タンパク分子の発現について調べたところ、いずれもCell Lysatesにおける発現パターンとほとんど変わらないことが分かった。一方、各細胞外小胞上の糖脂質についても解析を進めた結果、各細胞株における糖脂質発現パターンと同様に、腹膜播種を起こすwild株パターンと腹膜播種を起こさないKO株パターンに大別できることが明らかになった。各細胞株由来の糖脂質はそのまま細胞外小胞の膜を形成し、受容細胞に取り込まれた後にもリサイクルされ受容細胞の膜の一部になる可能性が高いことから、癌の悪性化を伝承する可能性も考えられた。次に細胞外小胞に含まれるマイクロRNA (miRNA)に着目し、受託解析によりNUGC4細胞の腹膜転移に関連するmiRNAの有無を調べることにした。NUGC4 cells由来エクソソームが癌微小環境構築にどのように関与するのかを解明する手がかりが得られると考えられた。miRNA解析の結果からは細胞外小胞の癌悪性化への関与が示唆された。しかしながら、血管内皮細胞や腹膜中皮細胞を用いた評価では、顕著な微小環境構築はまだ確認できていないのが現状である。今後の展開として、これまでに顕著な変化が見られている細胞膜上糖脂質とガレクチン-4の働きに着目して、腹膜播種を促進させるメカニズム解明を目指す。

The purpose of this study is to analyze the characteristics and functions of extracellular vesicles secreted by highly migratory gastric cancer cells and to standardize peritoneal mesothelioma cells. Comparison of extracellular vesicles secreted by KO cells and development cells, and enhancement of peritoneal migration In the same year, the purification and characterization of extracellular vesicles of NUGC4 cell lines (wild, Mock, KO and Rescue) were analyzed. Each extracellular Cell is important for the development of molecules. The results of analysis of glycolipid on each extracellular cell were as follows: glycolipid production in each cell line was the same as that in the peritoneal seeding. The possibility of the formation of extracellular membrane of each cell line from glycolipid is high, and the possibility of carcinogenesis is high. The presence or absence of miRNA in extracellular cells was analyzed and correlated with peritoneal migration in NUGC4 cells. NUGC4 cells are derived from a variety of micro-environmental structures. The results of miRNA analysis show that there is no correlation between extracellular vesicles and carcinogenesis. The vascular endothelial cells and peritoneal mesothelioma cells were evaluated and the microenvironment was constructed to confirm the status quo. In the future, the development of cell membrane glycolipid and peritoneal seeding will be promoted.