新規ラミニン融合遺伝子による扁平上皮癌の集団浸潤の分子機序の解明

ラミニン融合遺伝子のコンディショナルトランスジェニック（cTg）マウスの作製の作製が完了し、今後の動物実験に必要なマウス数の準備を進めるとともに、アデノ随伴初ウイルスによるCre-loxpを異所的に発現させるための実験系の構築を行った。本年度、Cre-loxp-GFPを発現させるためのアドレの随伴ウイルス（AAV）が完成し、その感染実験を野生型マウス口腔内に投与し、AAV感染をGFPの発現での経時的に検証し、投与後７日後にはAAV感染によるGFPの蛍光が舌上皮、食道上皮、肺胞上皮等で確認された。現在、小数のTgマウスにCre-loxp-GFP-AAVを投与し、10、20週後に当該組織のH&E染色による上皮組織の変化を調べる予定である。また、Tgマウスから初代細胞の上皮細胞を単離して、in vitroにおけるラミニン融合遺伝子の発現が上皮組織の形態、機能に及ぼす影響を検討しているが、上皮組織由来のケラチノサイトの初代培養が成功していないため、マウス胎児由来の線維芽細胞を不死化したものを用いた解析を進めている。

ラミニン融合遺伝子のコンディショナルトランスジェニック（cTg）マウスの作製の作製が完了し、今後の動物実験に必要なマウス数の準備を進めるとともに、アデノ随伴初ウイルスによるCre-loxpを異所的に発現させるための実験系の構築を行った。本年度、Cre-loxp-GFPを発現させるためのアドレの随伴ウイルス（AAV）が完成し、その感染実験を野生型マウス口腔内に投与し、AAV感染をGFPの発現での経時的に検証し、投与後７日後にはAAV感染によるGFPの蛍光が舌上皮、食道上皮、肺胞上皮等で確認された。現在、小数のTgマウスにCre-loxp-GFP-AAVを投与し、10、20週後に当該組織のH&E染色による上皮組織の変化を調べる予定である。また、Tgマウスから初代細胞の上皮細胞を単離して、in vitroにおけるラミニン融合遺伝子の発現が上皮組織の形態、機能に及ぼす影響を検討しているが、上皮組織由来のケラチノサイトの初代培養が成功していないため、マウス胎児由来の線維芽細胞を不死化したものを用いた解析を進めている。