腸管粘液由来の糖利用競争力を介したクレブシエラ菌の腸内定着に及ぼす影響の解明

通过竞争性利用肠道粘液中的糖分，阐明克雷伯氏菌对肠道定植的影响

• 批准号: 21K09861
• 负责人: 深町 はるか
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09861/
• 关键词: クレブシエラ; 腸管定着; 腸管免疫応答; gnotobioteマウス; germ-freeマウス; クレブシエラ菌; ホスフォトランスフェラーゼシステム

今年度は、昨年度確立したSPFおよび無菌マウスのクレブシエラ腸管定着マウスモデルを用いて、糖の取込み機構の１つであるマンノースホスホトランスフェラーゼシステム(PTS)の腸管への定着に及ぼす影響を解明することとした。初めに昨年に引き続き、マンノースPTSが腸管定着における競争上の優位性となるか、SPFクレブシエラ腸管定着マウスおよびクレブシエラgnotobioteマウスを用いてcompetitive assay(競合的コロニー形成法)で検討した。クレブシエラ菌野生株(WT)とマンノースPTS欠損株(KO)を等量混和し、マウスに感染後、1,3,7,14,21日後の糞便を回収し、マンノース分解能を指標とした寒天平板でWT,KOの菌数を求め、Competitive index(CI)=ratio out (KO/WT)/ratio in (KO/WT) CI<1:WT優位 CI>1:KO優位　で判定した。クレブシエラgnotobioteマウスでは、感染14,21日後はCI=0.52(p=0.0005),0.19(p=0.00018)となった。SPFクレブシエラ腸管定着マウスでは、感染3,7,14,21日後でCI=0.47(p=0.002), 0.29(p=0.0007), 0.18(p=0.0003), 0.15(p=0.0004)となり、SPF,gnotobiote共にWTが優位となり、マンノースPTSが腸管への定着に関与することが示された。続いて、腸管の免疫応答を解析するために、SPFクレブシエラ腸管定着マウスの腸管上皮間リンパ球および粘膜固有層リンパ球を採取し、CD3抗体、CD4抗体、CD45抗体、IFN-gamma抗体、IL17A/F抗体で染色し、FACS解析でTh1, Th17応答を解析を行っている。

Our は, establishment of yesterday's annual し た SPF お よ び sterile マ ウ ス の ク レ ブ シ エ ラ insufflate fixed on マ ウ ス モ デ ル を with い て, sugar の take 込 み institutions の 1 つ で あ る マ ン ノ ー ス ホ ス ホ ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ シ ス テ ム (PTS) の insufflate へ の fixed on に and ぼ す influence を interpret す る こ と と し た. Early め に yesterday in に lead き 続 き, マ ン ノ ー ス PTS が insufflate fixed on に お け る competition の primacy と な る か, SPF ク レ ブ シ エ ラ insufflate fixed on マ ウ ス お よ び ク レ ブ シ エ ラ gnotobiote マ ウ ス を with い て competitive assay (co-opetition コ ロ ニ ー formation method) で beg し 検 た. ク レ ブ シ エ ラ bacteria wild strains (WT) と マ ン ノ ー ス PTS owe damage plant (KO) を amount of mixed し, マ ウ ス に after infection, 1,3,7,14,21 の feces を 収 back later し, マ ン ノ ー ス can decompose を index と し た sees tablet で WT, KO の count を め and Competitive index(CI)=ratio out (KO/WT)/ratio in (KO/WT) CI<1:WT superior position CI>1:KO superior position で determination た た. ク レ ブ シ エ ラ gnotobiote マ ウ ス で は, infection, 14, 21 later は CI = 0.52 (p = 0.0005), 0.19 (p = 0.00018) と な っ た. SPF ク レ ブ シ エ ラ insufflate fixed on マ ウ ス で は, infection after 3,7,14,21 で CI = 0.47 (p = 0.002), 0.29 (p = 0.0007), 0.18 (p = 0.0003), 0.15 (p = 0.0004) と な り, SPF and gnotobiote に total WT が primacy と な り, マ ン ノ ー ス PTS が insufflate へ の fixed on に masato and す る こ と が shown さ れ た. 続 い て, insufflate の immune 応 answer を analytic す る た め に, SPF ク レ ブ シ エ ラ insufflate fixed on マ ウ ス の bowel loops between epithelial リ ン パ ball お よ び mucosa lamina propria リ ン パ ball を take し, antibody of CD3, CD4 antibodies, CD45, IFN - gamma antibodies, IL17A/F で dyeing し, both FACS parsing で Th1, Th17応 answer を explanation を line って って る る.

项目成果

口腔粘膜好中球の分化誘導における常在細菌叢の役割

常驻菌群在诱导口腔粘膜中性粒细胞分化中的作用

• 发表时间: 2023
• 作者: 永尾潤一;岸川咲吏;豊永憲司;根来（安松）香奈江;田﨑園子;田中芳彦;森 美菜，林 真奈美，中村 夏野，逸見 百江，黒澤 実愛，深町 はるか， 森崎 弘史，桑田 啓貴
• 通讯作者: 森 美菜，林 真奈美，中村 夏野，逸見 百江，黒澤 実愛，深町 はるか， 森崎 弘史，桑田 啓貴

ヒト口腔細菌叢移植マウスの急性肺障害誘導による誤嚥性肺炎マ ウスモデルの作製

人口腔菌群移植诱导小鼠急性肺损伤建立吸入性肺炎小鼠模型

• 发表时间: 2023
• 作者: 岸川咲吏;永尾潤一;豊永憲司;根来（安松）香奈江;田中芳彦;小田島健二 野上晋之介 梶田倫功 山内健介 熊本裕行 髙橋哲;林 真奈美，森 美菜，逸見 百江，黒澤 実愛，深町 はるか，森崎 弘史， 桑田 啓貴
• 通讯作者: 林 真奈美，森 美菜，逸見 百江，黒澤 実愛，深町 はるか，森崎 弘史， 桑田 啓貴

HOMA(ヒト口腔細菌定着)マウスモデルを用いた口腔常在菌による肺炎増悪誘導の解析

使用 HOMA（人类口腔细菌定植）小鼠模型分析口腔常驻细菌诱导肺炎恶化的情况

• 发表时间: 2022
• 作者: 林真奈美;逸見百江;森美菜;深町はるか;桑田啓貴
• 通讯作者: 桑田啓貴

森美菜、Natasa Trtic、逸見百江、中村夏野、林真奈美、深町はるか、桑田啓貴

森美奈、Natasa Trtic、百惠久美、中村夏乃、林真奈美、深町遥、桑田广隆

• 发表时间: 2022
• 作者: 常在細菌は口腔内の免疫細胞の分化に重要な役割を果たしている