口臭原因物質産生酵素の機能解析

产生引起口臭的物质的酶的功能分析

• 批准号: 03J07824
• 负责人: 深町 はるか
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J07824/
• 关键词: 口臭; 硫化水素; メチルメルカプタン; 揮発性硫化物; 口臭阻害剤; 二次元電気泳動

口臭の原因物質としてメチルメルカプタンや硫化水素といった揮発性硫化物が注目されている。これらの揮発性硫化物は口腔内細菌がメチオニンを基質としてメチルメルカプタンを、またシステインを基質として硫化水素を産生することが分かっている。特に、歯周病患者からは歯周ポケットの深さに比例して呼気中から高い濃度の揮発性硫化物が検出される。本研究では歯周病患者の歯肉縁下プラーク中の細菌であるPorphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum,およびTreponema denticolaに着目し、揮発性硫化物産生酵素をコードする遺伝子をクローニングし、これらの酵素学的な性質を解析した。現在までに、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaのメチオニン分解酵素、F. nucleatumのシステイン分解酵素を単離精製した。メチオニン分解酵素の性質としては、P.gingivalisとT.denticolaのメチオニン分解酵素のKm値を比較した結果、メチオニンに対する親和性はT.denticolaが極めて高いことが分かった。また、菌体から産生するメチルメルカプタン量をガスクロマトグラフィーで比較した結果、T.denticolaが口腔内に存在する程度の低濃度のメチオニンからメチルメルカプタンを高産生することが分かった。また、揮発性硫化物の発生を抑制するという報告のある塩化亜鉛について、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaの揮発性硫化物産生に対する抑制効果を解析した。まず、全菌体をから産生されるメチルメルカプタン量をガスクロマトグラフィーで測定した結果、産生されるメチルメルカプタン量は塩化亜鉛量に依存して抑制され、P.gingivalis, T.denticolaは10ppm, F.nucleatumは100ppmでメチルメルカプタン産生が完全に抑制された。つぎに、P.gingivalis, F.nucleatumおよびT.denticolaの組換えメチオニン分解酵素を用いて塩化亜鉛による酵素活性の抑制をみたところ、すべての酵素ともに、100ppmの塩化亜鉛でメチオニン分解酵素が完全に阻害されることから、塩化亜鉛によるメチオニン分解酵素の阻害がおこりメチルメルカプタンが産生されなくなることが明らかになった。

Cause の material と し て メ チ ル メ ル カ プ タ ン や sulfide water element と い っ た swing 発 sex sulfide が attention さ れ て い る. こ れ ら の swing 発 sex sulfide は bacteria in oral cavity が メ チ オ ニ ン を matrix と し て メ チ ル メ ル カ プ タ ン を, ま た シ ス テ イ ン を matrix と し て sulfide water element を produce す る こ と が points か っ て い る. に, 歯 weeks patients か ら は 歯 weeks ポ ケ ッ ト の deep さ に proportion し て in shout 気 か ら high concentration い の wield 発 sulfide が 検 out さ れ る. In this study, で 歯 歯 patients with periodontal disease have 歯 subcutaneous プラ で bacteria であるPorphyromonas gingivalis. Fusobacterium nucleatum, お よ び Treponema denticola に with mesh し, wield 発 sulfide produced enzyme を コ ー ド す る posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ し, こ れ ら の な properties of enzyme learn を parsing し た. Now ま で に, P.g ingivalis, motor ucleatum お よ び T.d enticola の メ チ オ ニ ン decomposition enzyme, f. nucleatum の シ ス テ イ ン decomposition enzyme を 単 from refined し た. メ チ オ ニ ン の decomposition enzyme properties と し て は, P.g ingivalis と T.d enticola の メ チ オ ニ ン decomposition enzyme の Km numerical を more し た results, メ チ オ ニ ン に す seaborne る affinity は T.d enticola が め extremely high て い こ と が points か っ た. ま た, bacteria か ら produce す る メ チ ル メ ル カ プ タ ン quantity を ガ ス ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で compare し た results, T.d enticola が に exist in oral cavity す の る degree low concentration の メ チ オ ニ ン か ら メ チ ル メ ル カ プ タ ン を high produce す る こ と が points か っ た. ま た, wield 発 sulfide の 発 raw を inhibit す る と い う report の あ る lead salt melt 亜 に つ い て, P.g ingivalis, motor ucleatum お よ び T.d enticola の swing 発 sulphide produces に す seaborne る unseen fruit を し analytical た. ま ず, total bacteria を か ら produce さ れ る メ チ ル メ ル カ プ タ ン quantity を ガ ス ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で determination し た results, generate さ れ る メ チ ル メ ル カ プ タ ン は amount of salt chemical 亜 lead quantity に dependent し て inhibit さ れ, P.g ingivalis, T.d enticola は 10 PPM, F.nucleatum <s:1> 100ppmでメチ でメチ メ メ カプタ カプタ カプタ が produces が complete に inhibition された. Youdaoplaceholder0 ぎに, p. gingivalis Motor ucleatum お よ び T.d enticola の group in え メ チ オ ニ ン decomposition enzyme を い て lead salt melt 亜 に よ る enzyme inhibition を の み た と こ ろ, す べ て の enzyme と も に, 100 PPM の lead salt melt 亜 で メ チ オ ニ ン decomposition enzyme が completely に resistance against さ れ る こ と か ら, salt 亜 lead に よ る メ チ オ ニ ン Decompose ferment の resistance against が お こ り メ チ ル メ ル カ プ タ ン が produce さ れ な く な る こ と が Ming ら か に な っ た.