ヒト腸管定着性増強を目的とした乳酸菌での腸管定着性因子FimHタンパク質の発現

肠道定植因子FimH蛋白在乳酸菌中的表达增强人体肠道定植

• 批准号: 11760187
• 负责人: 森田 英利
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Azabu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760187/
• 关键词: adhesion; FimH; lactic acid bacteria; adhesin; Fim H protein

本研究では,宿主細胞表面への乳酸菌の付着性向上および乳酸菌と病原性細菌との付着競合阻害を目的とし,E.coli由来Type 1線毛のFimHを乳酸菌で産生させるために,Lactobacillus helveticus CP790株由来のプロモーター,シグナル配列とアンカー配列を含んだプロティナーゼ(prtY)遺伝子を応用した。シャトルベクターpHY300PLKを用いてprtY遺伝子をサブクローニングしpY790を構築,さらにそのドメインにPCR増幅したfimH遺伝子を組み込んだ(pYEFH01の構築)。pYEFH01でE.coli JM105とLactobacillus casei CP680を形質転換し,その菌体タンパク質を抗FimHマウス血清および抗PrtYマウス血清を用いウェスタンブロッティング法に供し,両抗体に反応するタンパク質(分子量約40,000)を検出した。融合タンパク質の機能を解析するために,両形質転換体の菌体タンパク質をそれぞれ用い,Type1線毛をもつE.coli ORN103(pSH2)のヒト結腸線癌由来Caco-2細胞への付着阻害試験を行なった。その結果,各形質転換体の菌体タンパク質の添加によりE.coli ORN103(pSH2)の付着が阻害された。このことから,産生された融合タンパク質がCaco-2細胞への付着性を有し,結果的にE.coli ORN103(pSH2)のCaco-2細胞への競合阻害することが認められ,各形質転換体はFimHと同じ機能を示す融合タンパク質を菌体内で産生していることが示めされた。以上,L.caseiにおいて融合タンパク質遺伝子を発現させるためのプラスミドpYEFH01が構築できた。産生されたこの融合タンパク質は,同じマンノースを認識し付着するE.coliを競合阻害することが認められた。

In this study, the host cell surface lactic acid bacteria (Lactobacillus), pathogenicity of lactic acid bacteria (Lactobacillus), E.coli, Type 1, FimH, Lactobacillus, Lactobacillus helveticus CP790, Lactobacillus helveticus CP790, Lactobacillus, Lacto This is the first time that the pHY300PLK has been shown to have a pY790 profile. The PCR image has been displayed in the fimH image, and the pYEFH01 image has been displayed in the pYEFH01 image. PYEFH01, E.coli JM105, Lactobacillus casei CP680, anti-FimH, anti-PrtY, anti-PrtY, antibody (molecular weight about 40000) and antibody (molecular weight about 40000). The fusion mechanism was used to analyze the disease, the bacteria were used, and the Type1 hair was detected by E.coli ORN103 (pSH2). The cancer results showed that the cancer cells were responsible for blocking the damage. The results showed that the addition of E.coli ORN103 (pSH2) was effective to block the growth of mycelia. In the end, E.coli ORN103 (pSH2) Caco-2 cells were used to prevent the death of bacteria, and the same machines of all shapes and shapes were used to display the fusion bacteria in vivo. The results showed that the E.coli ORN103 (pSH2) Caco-2 cells were sensitive and sensitive. Above, the L.casei data fusion is based on the integration of the data. This is the first time that you can see that you are going to have a problem. You are going to have a problem with your pYEFH01. In the same way, you know, you know,

项目成果

Morita et al.: "No Increase in Verocytotoxin Production/Release was Induced in Escherichia coli O157:H7 Death Caused by Nitric Oxide"Applied and Environmental Microbiology. 183(in press). (2001)

Morita 等人：“一氧化氮引起的大肠杆菌 O157:H7 死亡未诱导 Verocytoxin 产生/释放增加”应用和环境微生物学。

森田英利(分担): "食品学各論"吉田勉 編著(三共出版). 12 (1999)

森田英俊（合着）：《食品研究的特殊理论》，吉田努编（三共出版）12（1999）。

森田英利(分担): "生体内一酸化窒素(NO)実験プロトコール"吉村哲彦 編著(共立出版). 4 (2000)

Hidetoshi Morita（撰稿人）：吉村哲彦编辑的“体内一氧化氮（NO）实验方案”（Kyoritsu Shuppan）4（2000）。