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膜型増殖因子と受容体の発光蛍光デュアルイメージングによる歯肉がんの浸潤機構の解析

膜型生长因子和受体发光荧光双重成像分析牙龈癌侵袭机制

基本信息

批准号：
21K09864
负责人：
福田信治
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

高齢化に伴い、日本の口腔がん罹患率は増加を続けている。肺がんや乳がんなどに比べ、口腔がんに特化した抗がん剤開発が遅れていることも問題である。このため、口腔がんの病態に関わる分子機構の解明や、治療標的となり得る分子群の特定は重要な課題となっている。本研究では、研究代表者がこれまで研究を進めてきた増殖因子EGFファミリーとEGF受容体シグナル伝達経路に焦点をあて、同リガンドファミリーが歯肉がん細胞の増殖や転移に果たす役割を明らかにする。EGFファミリーの分子が細胞表面でどのように分布するかを顕微鏡下で可視化するため、EGFファミリーの一員であるAmphiregulin (AREG)を発光酵素Gaussia Luciferase (GLase)との融合タンパク質として発現するプラスミドを構築した。発光顕微鏡を用いた観察を行うため、骨肉腫細胞HT1080に遺伝子導入したところ、AREGは細胞表面に検出され、分泌の瞬間が捉えられた。細胞が進展しているleading edgeの部分は特に顕著な極在が認められた。野生型GLaseは一過的に発光し、細胞表面における持続的な観察が難しいため、長時間撮影を可能にする変異体GLaseを構築し、AREG-GLaseのライブイメージングを行なった。現在、基質であるセレンテラジン濃度など、安定的にAREGを撮影するための条件検討を進めている。またEGFファミリーメンバーであるTGF-alphaとHB-EGFについても同様のプラスミド構築と歯肉がん細胞株Ca9-22の遺伝子導入条件の検討中である。また、歯肉がんと骨との関連として、同発光システムを使った骨関連タンパク質の分泌解析を行った。

In Japan, the incidence of oral diseases has increased due to high mortality. The lungs, breasts, and oral cavity are specialized and resistant to development. The molecular mechanism of oral cavity disease and the molecular group of therapeutic target are important topics. This study focuses on the relationship between the proliferation factor EGF receptor and the EGF receptor pathway, and clarifies the effects of EGF receptor on the proliferation and migration of dental cells. EGF is a member of Amphiregulin (AREG), a light-producing enzyme Gaussia Luciferase (GLase), and a member of Amphiregulin (AREG). Light microscopy is used to detect the expression of genes in osteoma cells HT1080, and the expression of genes in AREG cells is detected instantaneously. The leading edge of the cell is the leading edge of the cell. Wild-type GLase has a long history of light emission, persistent detection on cell surfaces, and long-term imaging. Now, the substrate temperature and concentration, stability of AREG and the conditions for the analysis are discussed. The study of TGF-alpha and HB-EGF gene transfer conditions for the construction of cell line Ca9 -22 was carried out. The relationship between the two substances was analyzed by means of the same method.