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細胞工学的手法を用いたグリアーサブセットの選別と移植による損傷中枢神経の再生促進

利用细胞工程技术选择和移植神经胶质亚群来促进受损中枢神经系统的再生

基本信息

批准号：
11780585
负责人：
池島宏子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年報告したように、本研究ではアストログリア特異的なマウステネイシン遺伝子の発現調節領域をすでに見出している。このプロモーター領域の下流に細胞破壊作用のある外来遺伝子、ヘルペスシンプレックスウイルスーチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子をつなぎ(TN6/TK)アストログリア初代培養系へ導入して発現させた。この時、コントロールとして、プロモーターなしの導入遺伝子(-/TK)も作成し同様に導入した。発現ベクター内にはネオマイシン耐性遺伝子が組み込まれているため、培養メディウム中にG418を加えて2週間培養したところ、導入遺伝子が組み込まれたアストログリアのみ生き残った。次に、培養メディウム中にヌクレオシドのアナログであるガンシクロビルを加え、3日間培養し、クリスタルバイオレットで染色して生存率を求めた。その結果、ガンシクロビルが低濃度の場合生存率は80%程度であったが、高濃度になるに従い生存率は低下し、最終的には60%生存率で一定となった。この時、-/TKを導入したアストログリアではガンシクロビルの濃度に関わらず生存率は100%であった。また、コンストラクトを導入していないアストログリアでも同様に生存率100%であった。生き残ったアストログリアをテネイシン抗体を用いて染色したところ、すべてのアストログリアでテネイシンの発現は認められなかった。一方、-/TKを導入したアストログリアではテネイシン陽性、陰性両方のアストログリアが認められた。以上のことから、ガンシクロビル存在下で生き残ったアストログリアーサブセットはテネイシン陰性アストログリアである事が示唆された。現在、今回選別されたアストログリアーサブセットを用いてin vitroでの機能解析を進めている。また、以上の結果をまとめ、2000年12月の第23回日本分子生物学会で発表を行い、現在Mol.Brain Res.に投稿中である。

In this study, we found out the regulatory domain of gene expression in different species. The introduction of foreign genes, such as HSV-TK gene (TN6/TK), into the primary culture line was developed. The time, location, and location of the entry (-/TK) are the same as the entry. G418 was cultured for 2 weeks in the culture medium, and the resistant gene was introduced into the culture medium. In addition, the survival rate of the culture medium was calculated by increasing the survival rate of the culture medium. As a result, the survival rate was 80% at low concentrations, lower at high concentrations, and 60% at the end. When-/TK is introduced, the survival rate is 100%. 100% of the population is still alive. The development of the new technology will be the first step in the development of the new technology. One side, -/TK, and the other side are both positive and negative. In order to improve the quality of the products, we should pay attention to the quality of the products. Now, we're going to select the function analysis of the vitro. The above results were published in December 2000 at the 23rd meeting of the Japanese Molecular Biology Society.