細胞工学的手法を用いたグリアーサブセットの選別と移植による損傷中枢神経の再生促進

利用细胞工程技术选择和移植神经胶质亚群来促进受损中枢神经系统的再生

• 批准号: 11780585
• 负责人: 池島 宏子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780585/
• 关键词: アストログリア; テネイシン; プロモーター; HSV-TK; GFAP; 中枢神経; 再生; 移植; 中枢神経系; 再生促進; 再生抑制

昨年報告したように、本研究ではアストログリア特異的なマウステネイシン遺伝子の発現調節領域をすでに見出している。このプロモーター領域の下流に細胞破壊作用のある外来遺伝子、ヘルペスシンプレックスウイルスーチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子をつなぎ(TN6/TK)アストログリア初代培養系へ導入して発現させた。この時、コントロールとして、プロモーターなしの導入遺伝子(-/TK)も作成し同様に導入した。発現ベクター内にはネオマイシン耐性遺伝子が組み込まれているため、培養メディウム中にG418を加えて2週間培養したところ、導入遺伝子が組み込まれたアストログリアのみ生き残った。次に、培養メディウム中にヌクレオシドのアナログであるガンシクロビルを加え、3日間培養し、クリスタルバイオレットで染色して生存率を求めた。その結果、ガンシクロビルが低濃度の場合生存率は80%程度であったが、高濃度になるに従い生存率は低下し、最終的には60%生存率で一定となった。この時、-/TKを導入したアストログリアではガンシクロビルの濃度に関わらず生存率は100%であった。また、コンストラクトを導入していないアストログリアでも同様に生存率100%であった。生き残ったアストログリアをテネイシン抗体を用いて染色したところ、すべてのアストログリアでテネイシンの発現は認められなかった。一方、-/TKを導入したアストログリアではテネイシン陽性、陰性両方のアストログリアが認められた。以上のことから、ガンシクロビル存在下で生き残ったアストログリアーサブセットはテネイシン陰性アストログリアである事が示唆された。現在、今回選別されたアストログリアーサブセットを用いてin vitroでの機能解析を進めている。また、以上の結果をまとめ、2000年12月の第23回日本分子生物学会で発表を行い、現在Mol.Brain Res.に投稿中である。

如去年报道的那样，这项研究已经发现了星形胶质细胞特异性小鼠tenascin基因的表达调节区域。将单纯疱疹病毒 - 胸腺苷激酶（HSV-TK）基因是该启动子区域下游具有细胞质作用的外国基因，并被引入主要的星形胶质细胞培养系统中并表示。目前，也将无启动子转基因（ - /tk）作为对照制作，并同样引入。由于新霉素耐药基因被掺入表达载体中，因此将G418添加到培养基中并培养2周，只有Astroglia，该胶质细胞综合，存活。接下来，将核苷的类似物Ganciclovir添加到培养基中，并培养3天，并用晶体紫染色以确定生存率。结果，当ganciclovir处于低浓度时，存活率约为80％，但是随着浓度达到较高的浓度，生存率降低，最终以60％的存活率保持恒定。目前，引入 - /TK的星形胶质体的存活率为100％，而不管Ganciclovir的浓度如何。此外，尚未引入结构的星形胶质体类似地，生存率为100％。存活的星形胶质细胞染色，用替氏蛋白抗体染色，并且在所有星形胶质细胞中未观察到Tenascin的表达。另一方面，观察到 - /tk的星形胶质细胞观察到替氏蛋白阳性和阴性星形胶质细胞。这些结果表明，在Ganciclovir存在下幸存下来的星形胶质细胞子集是Tenascin阴性的星形胶质细胞。当前，使用这次选择的Astrogliar子集在体外进行了功能分析。上述结果还在2000年12月在日本分子生物学学会上进行了汇总和介绍，目前已发布到Mol.Brain Res。

项目成果

湯浅茂樹: "グリアのマーカー"Clinical Neuroscience. 17・9. 975-978 (1999)

汤浅茂树：“神经胶质标记物”临床神经科学 17・978（1999）。