細胞工学的手法を用いたグリアーサブセットの選別と移植による損傷中枢神経の再生促進

利用细胞工程技术选择和移植神经胶质亚群来促进受损中枢神经系统的再生

• 批准号: 11780585
• 负责人: 池島 宏子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780585/
• 关键词: アストログリア; テネイシン; プロモーター; HSV-TK; GFAP; 中枢神経; 再生; 移植; 中枢神経系; 再生促進; 再生抑制

昨年報告したように、本研究ではアストログリア特異的なマウステネイシン遺伝子の発現調節領域をすでに見出している。このプロモーター領域の下流に細胞破壊作用のある外来遺伝子、ヘルペスシンプレックスウイルスーチミジンキナーゼ(HSV-TK)遺伝子をつなぎ(TN6/TK)アストログリア初代培養系へ導入して発現させた。この時、コントロールとして、プロモーターなしの導入遺伝子(-/TK)も作成し同様に導入した。発現ベクター内にはネオマイシン耐性遺伝子が組み込まれているため、培養メディウム中にG418を加えて2週間培養したところ、導入遺伝子が組み込まれたアストログリアのみ生き残った。次に、培養メディウム中にヌクレオシドのアナログであるガンシクロビルを加え、3日間培養し、クリスタルバイオレットで染色して生存率を求めた。その結果、ガンシクロビルが低濃度の場合生存率は80%程度であったが、高濃度になるに従い生存率は低下し、最終的には60%生存率で一定となった。この時、-/TKを導入したアストログリアではガンシクロビルの濃度に関わらず生存率は100%であった。また、コンストラクトを導入していないアストログリアでも同様に生存率100%であった。生き残ったアストログリアをテネイシン抗体を用いて染色したところ、すべてのアストログリアでテネイシンの発現は認められなかった。一方、-/TKを導入したアストログリアではテネイシン陽性、陰性両方のアストログリアが認められた。以上のことから、ガンシクロビル存在下で生き残ったアストログリアーサブセットはテネイシン陰性アストログリアである事が示唆された。現在、今回選別されたアストログリアーサブセットを用いてin vitroでの機能解析を進めている。また、以上の結果をまとめ、2000年12月の第23回日本分子生物学会で発表を行い、現在Mol.Brain Res.に投稿中である。

Yesterday reported in し た よ う に, this study で は ア ス ト ロ グ リ ア specific な マ ウ ス テ ネ イ シ ン heritage 伝 son の 発 now adjust field を す で に shows し て い る. こ の プ ロ モ ー タ の ー field dirty に cells broken 壊 の あ る foreign heritage 伝, ヘ ル ペ ス シ ン プ レ ッ ク ス ウ イ ル ス ー チ ミ ジ ン キ ナ ー ゼ (HSV TK) heritage 伝 son を つ な ぎ (TN6 / TK) ア ス ト ロ グ リ ア へ import original training department し て 発 now さ せ た. こ の, コ ン ト ロ ー ル と し て, プ ロ モ ー タ ー な し の import legacy 伝 child (- / TK) も made し with others に import し た. Within 発 now ベ ク タ ー に は ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son が group み 込 ま れ て い る た め, cultivating メ デ ィ ウ ム in に G418 を plus え て between 2 weeks training し た と こ ろ, import but 伝 が group み 込 ま れ た ア ス ト ロ グ リ ア の み raw き residual っ た. In time に, cultivating メ デ ィ ウ ム に ヌ ク レ オ シ ド の ア ナ ロ グ で あ る ガ ン シ ク ロ ビ ル を え, 3 day training し, ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト で dyeing し を て survival beg め た. そ の results, ガ ン シ ク ロ ビ ル が low concentration degree of 80% surial は で の occasions あ っ た が, high concentration に な る に 従 い low survival rate は し, eventually に は 60% surial で must と な っ た. こ の, - / TK を import し た ア ス ト ロ グ リ ア で は ガ ン シ ク ロ ビ ル の concentration に masato わ ら ず 100% surial は で あ っ た. ま た, コ ン ス ト ラ ク ト を import し て い な い ア ス ト ロ グ リ ア で も with others に survival rate was 100% で あ っ た. Raw き residual っ た ア ス ト ロ グ リ ア を テ ネ イ シ を ン antibody with い て dyeing し た と こ ろ, す べ て の ア ス ト ロ グ リ ア で テ ネ イ シ ン の 発 は now recognize め ら れ な か っ た. One side, -/TKを import たアストログリアで たアストログリアで テネ テネ シ シ positive and negative two sides アストログリアが recognize められた. Above の こ と か ら, ガ ン シ ク ロ ビ ル で き raw in the presence of residual っ た ア ス ト ロ グ リ ア ー サ ブ セ ッ ト は テ ネ イ シ ン negative ア ス ト ロ グ リ ア で あ が る things in business さ れ た. Now, this time select されたアストログリア サブセットを サブセットを use the て てin vitroで <s:1> function to parse を into めて る る. Youdaoplaceholder0. The above <s:1> results are をまとめ, published in the 23rd で issue of the Japanese Society for Molecular Biology in December 2000 を, and are currently being submitted to Mol.Brain Res.に である.

项目成果

湯浅茂樹: "グリアのマーカー"Clinical Neuroscience. 17・9. 975-978 (1999)

汤浅茂树：“神经胶质标记物”临床神经科学 17・978（1999）。