Three-dimensional construction of iSALT in contact dermatitis-attracted phases using CLEM-FIB/SEM

使用 CLEM-FIB/SEM 三维构建接触性皮炎诱发阶段的 iSALT

• 批准号: 17K10222
• 负责人: 夏秋 洋平
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-01-04 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K10222/
• 关键词: 接触皮膚炎; FIB/SEM; CLEM; NIRB; iSALT; 医療・福祉; 電子顕微鏡; 免疫学; 皮膚科学

実験計画１の＜CLEM-FIB/SEM技術による皮膚観察技術の確立：接触皮膚炎惹起相におけるiSALTを介した皮膚内抗原提示を解析する要素技術＞について、当初はハプテンで感作したC57BL/6マウスの表在リンパ節から回収したT細胞を赤色蛍光で標識し、これをCD11c-YFPマウス（CD11c陽性細胞（樹状細胞）がYFP蛍光を発するよう遺伝子改変されたマウス）へ養子移入したのち、マウスの耳介に接触過敏反応を惹起し、二光子励起顕微鏡を用いて皮膚炎惹起後の皮膚内でのdDCsとメモリーT細胞を可視化、かつ各タイムコース（惹起前、惹起直後、1時間、3時間、6時間、12時間、24時間）ごとに固定し、経時的形態変化を観察し、それに続きCLEM-FIB/SEMによる三次元電子顕微鏡観察を実施する予定であったが、研究責任者の臨床業務により充分な研究時間が確保できず、また人員不足もあり、マウスの購入・飼育ができなかったことから、本プロジェクトの進捗状況は滞っている。そこで、引き続き実験動物の導入準備を進めながら、同時にiSALTをヒトの皮膚で観察する計画を追加することとし、ヒトの接触皮膚炎患者から渉猟した皮膚試料に対しFIB/SEMを用いて皮膚内の樹状細胞ならびにT細胞の会合を観察することとした。具体的には、2人の接触皮膚炎患者から皮膚試料を渉猟し、FIB/SEMで撮像を行った。現在、本データを用いて三次元再構築を進めている。

Experimental Project 1: < CLEM-FIB/SEM technology による Skin 観 examination technology <e:1> established: Contact dermatitis provoked phase に お け る iSALT を interface し た skin in antigen suggest を parsing す る elements technology > に つ い て, original は ハ プ テ ン で feeling as し た C57BL / 6 マ ウ ス の table in リ ン パ section か ら back 収 し た T cells, red light 蛍 を で identification し, こ れ を CD11c - YFP マ ウ ス (CD11c positive cells (tree is fine Cell) が YFP 蛍 light を 発 す る よ う heritage 伝 child change - さ れ た マ ウ ス) へ adopted into し た の ち, マ ウ ス の ear interface に contact allergy against 応 を provoked し, two photon excitation 顕 micromirror を with い て dermatitis provoked within の skin after で の dDCs と メ モ リ ー t-cell を visualization, か つ each タ イ ム コ ー ス (provoked, provoked straight after, before 1 time, 3 Time, 6, 12, 24 time between) ご と に morphological variations of fixed し, 経 を 観 し, そ れ に 続 き CLEM FIB/SEM に よ る three dimensional electronic 顕 micromirror 観 examine を be applied す る designated で あ っ た が の clinical, research responsible business に よ り な study full time が ensure で き ず, ま た understaffed も あ り, マ ウ ス の , the feeding and breeding, が で き な か っ た こ と か ら, this プ ロ ジ ェ ク ト の into 捗 condition は hysteresis っ て い る. And led そ こ で き 続 き be 験 animal の import preparation を into め な が ら, at the same time に iSALT を ヒ ト の skin で す was 観 る project を additional す る こ と と し, ヒ ト の contact dermatitis patients か ら involved 猟 し た skin sample に し seaborne FIB/SEM を い の て skin dendritic cells な ら び に T cells meet の を 観 examine す る こ と と し た. The specific に に, two people who were exposed to the skin samples of patients with dermatitis ら を involved 猟 った, FIB/SEMで pinching images を row った. Now, this デ デ タを タを reconstructs を into めて る る る in the third dimension using デ て.