The new aspects of lysosomal signal regulation by Ragulator

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Ragulator構造の機能解析について本年度は以下に示す解析を行った。Ragulator構造と相互作用する分子について、昨年度までにturboIDによる近接標識と質量分析による解析を行った。今年度はビオチン標識タンパク質の精製手法を変えて再度検討した。また同時に、架橋剤を用いてRagulator構造と相互作用する分子についても精製し、質量分析による解析を行った。正常なRagulator構造と一部機能を欠損したRagulator構造を用いた相互作用分子の解析結果から、正常なRagulator構造特異的な相互作用分子の集団を抽出した。多くが既知の分子であり、Gator1やGator2の構成因子も検出された。一方でGator1と相互作用してリソソーム膜局在を促すKicstor構成因子は検出されなかった。RagulatorとGator1はRagA/Cを介して複合体を形成し得ることが報告されているが、今回の結果を含め、これまでの解析結果はそれとは別の相互作用形式が存在する可能性を示している。また新たにRagulatorと相互作用する因子としてRab7を検出した。Rab7の活性とリソソームの局在や形状との関連を調べたところ、mTORC1活性とは負の相関を示すことが判明した。これまでの研究でmTORC1の活性はRab7の発現を抑制するという結果を報告してきたが、今回の観察結果はmTORC1の活性調節機構にRab7が介在し、ポジティブフィードバックを行っている可能性を示すものとなる。その具体的なメカニズムについては今後さらに調べる必要がある。