The new aspects of lysosomal signal regulation by Ragulator

Ragulator 溶酶体信号调节的新方面

基本信息

批准号：
20K06623
负责人：
名田茂之
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06623/
关键词：
mTORC1 Ragulator Gator1 Rab7 goblet cell DEPDC5 PP2A リソソーム

项目摘要

Ragulator構造の機能解析について本年度は以下に示す解析を行った。Ragulator構造と相互作用する分子について、昨年度までにturboIDによる近接標識と質量分析による解析を行った。今年度はビオチン標識タンパク質の精製手法を変えて再度検討した。また同時に、架橋剤を用いてRagulator構造と相互作用する分子についても精製し、質量分析による解析を行った。正常なRagulator構造と一部機能を欠損したRagulator構造を用いた相互作用分子の解析結果から、正常なRagulator構造特異的な相互作用分子の集団を抽出した。多くが既知の分子であり、Gator1やGator2の構成因子も検出された。一方でGator1と相互作用してリソソーム膜局在を促すKicstor構成因子は検出されなかった。RagulatorとGator1はRagA/Cを介して複合体を形成し得ることが報告されているが、今回の結果を含め、これまでの解析結果はそれとは別の相互作用形式が存在する可能性を示している。また新たにRagulatorと相互作用する因子としてRab7を検出した。Rab7の活性とリソソームの局在や形状との関連を調べたところ、mTORC1活性とは負の相関を示すことが判明した。これまでの研究でmTORC1の活性はRab7の発現を抑制するという結果を報告してきたが、今回の観察結果はmTORC1の活性調節機構にRab7が介在し、ポジティブフィードバックを行っている可能性を示すものとなる。その具体的なメカニズムについては今後さらに調べる必要がある。

今年对间依仪结构的功能分析进行了以下分析。截至去年，通过与涡轮和质谱法接近标记分析了与间的结构相互作用的分子。今年，我们更改了生物素标记蛋白的纯化方法，并重新检查了它。同时，还通过质谱法纯化并分析了使用交联链链接结构相互作用的分子。从缺乏某些功能的正常间倾斜剂结构和摇摆器结构的相互作用的分析结果中提取了正常间发好的相互作用分子的种群。其中许多是已知的分子，还检测到Gator1和Gator2的构成因子。另一方面，未检测到与Gator1相互作用以促进溶酶体膜定位的Kicstor成分因子。据报道，ragulator和gator1可以通过raga/c形成复合物，但是先前的分析结果（包括当前的结果）表明可能存在不同类型的相互作用的可能性。 Rab7还被发现为与摊贩相互作用的新代理。当研究RAB7活性与溶酶体定位和形状之间的关联时，发现MTORC1活性是负相关的。先前的研究报告说，MTORC1的活性抑制了RAB7的表达，但是该观察结果表明RAB7介导了MTORC1活性调节的机制，提供了积极的反馈。将来应进一步研究其特定机制。