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アクチン骨格形成におけるSrcファミリーの機能

Src家族在肌动蛋白骨架形成中的功能

基本信息

批准号：
15770127
负责人：
名田茂之
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770127/
关键词：
Cortactin Src 接着斑アクチン Csk ポドソーム

项目摘要

CortactinはSrcファミリーチロシンキナーゼの基質となるアクチン骨格結合蛋白であり、アクチン重合の起点としてラメリポディアの先端部やフィロポディア基部に局在化してアクチン重合を調節していると考えられる。Cskノックアウト細胞ではSrcの過剰な活性化によりCortactinの顕著なチロシンリン酸化の亢進と接着斑近傍でのドット状の局在化(ポドソーム)によりアクチン骨格が異常となることがこれまでに観察されている。本年度の研究では、RNAiによるCortactinのノックダウン、Srcの活性阻害剤によるCortactinのリン酸化とアクチン骨格の変化について検討した。まずCortactinのノックダウンにより、ラメリポディアの形成が阻害される傾向が観察された。さらにCskノックアウト細胞では、ポドソームが消失し、アクチンストレスファイバーの構造が正常化することが観察された。Src阻害剤PP2で処理した場合、Cskノックアウト細胞でCortactinのチロシンリン酸化が低下するとともにアクチンストレスファイバーの形成も正常化した。これらのことからポドソーム形成にはSrcの活性化とCortactinの存在そのものが必須であることが判明した。またタイムラプス観察の結果、正常細胞でも一時的に小さなポドソーム様の構造が形成されることがわかった。この正常細胞でのポドソーム様構造は接着斑に隣接した部位で起こっており、Cskノックアウト細胞ではこの構造が肥大化してポドソームとなることが推測された。これらの反応が培養細胞だけでなく生体内でも起こり得ることを示すために、皮膚上皮でCskの欠失が起こるコンディショナルノックアウトマウスを作製して解析したところ、マウス生体においても細胞内にポドソーム様のアクチンとCortactinの凝集塊が形成されることが判明した。

Cortactin is a protein that binds to the matrix and overlaps with the matrix. Csk cells are activated by Src, and then activated by Cortactin, and then activated by Cortactin, and then activated by Cortactin. This year's research is aimed at investigating the effects of RNAi on the activity of Cortactin and Src. Cortactin has a tendency to prevent the formation of harmful substances. In the past, Csk has been investigating the structure of the cell, which has been normalized. Src inhibitor PP2 is processed in the presence of Csk inhibitor, and the formation of Csk inhibitor is normalized due to the decrease of Csk inhibitor. The activation of Src and the existence of Cortacin are necessary for the formation of a complex system. As a result of this observation, normal cells were formed into small, complex structures. The structure of these normal cells is probably hypertrophic, and the adjacent sites are probably hypertrophic. In this way, it is clear that the formation of Cortactin aggregates in cultured cells is due to the absence of Csk in the epithelium of the skin.