探索的薬物動態研究に資する高い薬物代謝機能を発現したヒト代替肝細胞の培養系構築
构建具有高药物代谢功能的人替代肝细胞培养体系,有助于探索性药代动力学研究
基本信息
- 批准号:20K07161
- 负责人:
- 金额:$ 2万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2020
- 资助国家:日本
- 起止时间:2020-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
創薬研究での薬物動態と毒性評価に資するヒト代替肝細胞(ヒト肝細胞様細胞)を創製するために、ヒト肝芽腫由来細胞株のHuh-7細胞またはヒト肝癌由来細胞株のHepG2細胞をDNAメチル基転移酵素(DMNT)害剤である5-アザシチジン(5-Aza)でエピゲノム化処理することにより、第I相反応酵素である7種類のシトクロムP450(CYP1A2, 2B6, 2C8, 2C9,2C19, 2D6, 3A)分子種および第II相反応酵素であるグルクロン酸転移酵素(UGT)と硫酸転移酵素(SULT)活性を高発現させるための最適培養条件について検討中し、明らかにした。今年度は以下の4項目について検討した。① 5-Aza処理の最適濃度は、HepG2細胞では2.5 μMであり、Huh-7細胞では10 μMであったが、処理後の薬物代謝酵素活性の発現誘導効果を両細胞間で比較すると、Huh-7細胞の方が明らかに低く、またHepG2細胞で認められたCYP2B6とCYP2C8の発現誘導が全く認められなかった。② HepG2細胞の5-Aza暴露処理中のDMEM培地中グルコース濃度について検討したところ、高グルコース濃度よりも低グルコース濃度の培地の方がより高い薬物代謝酵素活性の発現が認められた。③ HepG2細胞の5-Aza暴露処理中のDMEM培地へのDMSO添加の効果を検討したところ、CYP3AとUGT酵素活性においてより高い発現が認められたが、他の薬物代謝酵素活性は低下する傾向が認められた。④ 5-aza処理HepG2細胞の薬物代謝酵素機能を維持するための培養培地について、従来のDMEMと市販の3種類のヒト肝細胞培養培地で比較検討したところ、各培地において各薬物代謝酵素ごとに活性の維持能力に多少の違いはあったが、コストパフォーマンスと全ての薬物代謝酵素活性を考慮すると、DMEM培地での培養が推奨される。
To study the dynamics of toxicology and toxicities of human hepatoma, and to replace the hepatocytes and germs of the liver in the study of the dynamics and toxicity of hepatotoxics. the cells of HepG2-7 cells were isolated from hepatoma cells, and the origin of hepatoma was derived from the cell strain of HepG2-7 cells. The gene transferase (DMNT) gene transferase (DMNT) was expressed in the cells of HUH-7 cells, hepatoma cells, hepatoma cells, hepat On the contrary, enzyme P450 (CYP1A2) in the category of enzyme 7. 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 3A) Molecular species enzyme No. II. The activity of UGT and SULT was higher than that of other enzymes. The following four items will be awarded this year. 1. 5-Aza, HepG2, 10 μ M, 10 μ M, 10 μ M, 2. HepG2 cell 5-Aza exposure: in DMEM culture, the enzyme activity was increased, and the enzyme activity was increased. 3. In the treatment of HepG2 cell 5-Aza exposure, DMEM culture, DMSO addition, CYP3A UGT enzyme activity, high enzyme activity, low enzyme activity. 4. The 5-aza HepG2 cell culture enzyme machine can maintain the activity of the whole enzyme in the culture of the whole enzyme. The cell culture of the liver in the DMEM market is much higher than that of the culture in different places. DMEM Peiji, Peiji, PUBG, HUBG, etc.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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