マウス骨髄移植技術を用いた肝不全発症機構の解明とその臨床応用に関する研究

小鼠骨髓移植技术阐明肝衰竭发生机制及其临床应用的研究

• 批准号: 14570458
• 负责人: 山田 泰弘
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570458/
• 关键词: 骨髄移植; ノックアウトマウス; 急性肝障害モデル; TNF; IL-6; ガラクトースアミン; LPS; 生存率

C57B1/6のWTマウスに対し放射線照射を行うことにより、血液幹細胞を死滅させ、その照射マウスに対してWTならびにTNFやIL-6ノックアウトマウスから抽出した骨髄を投与して骨髄移植マウスを作成することに成功した。照射マウスに対して骨髄を移植しない場合には、これらのマウスは1ヶ月以内に死滅してしまうことを確認している。これらの移植済みマウスを1ケ月間無菌状態で飼育し、移植骨髄が生着したのを確認した後に、ガラクトースアミン並びにLPSを腹腔内に投与することにより,急性肝障害モデルを作成した。H&E染色を行ったところ、その時間的経過における肝障害の状態の違いを確認することが出来た。すなわちIL-6 KO移植モデルにおいてWTに比較してより早期の肝障害が観察されると同時に、TNF KOモデルにおいては、その肝障害が遅延することを初めて観察した。血清中の肝機能測定により肝障害の度合いの差異も裏付けられている。生存率の差異においては、さらに顕著であり、WT移植モデルにおいて処置後12〜18時間後に死滅するのに対して、IL-6 KO移植モデルにおいては処置後6〜8時間以内にその全てが死滅してしまう。TNF KOモデルにおいては、処置後16時間後より個体死が認められるようになり、処置後30時間後になってその全てが死滅していくのである。このように各種サイトカインを骨髄中からノックアウトすることにより、肝臓における障害の差が認められるようになったことは、今まで例を見ないことであり、今後は影響を及ぼしたサイトカインの経路を検討し、肝障害機序の解明について検討する予定である。

通过辐照C57B1/6 wT小鼠，将血干细胞杀死，并从WT和TNF或IL-6基因敲除小鼠中提取的骨髓对辐照小鼠施用，以产生骨髓移植小鼠。已经确认，如果未植入辐照小鼠，这些小鼠将在一个月内死亡。将这些植入的小鼠保持无菌一个月，并确认植入的骨髓植入后，腹膜内给予半乳糖酰胺和LPS产生了急性肝损伤的模型。当进行H＆E染色时，随着时间的推移，肝损伤状态的差异得到了确认。换句话说，与WT相比，在IL-6 KO植入模型中观察到较早的肝损伤，这是第一次观察到肝脏损伤在TNF KO模型中延迟了。血清中肝功能的测量也证实了肝损伤程度的差异。生存率的差异甚至更为明显，在WT植入模型中治疗后12-18小时杀死，而在IL-6 KO植入模型治疗后6-8小时内，所有这些差异都死亡。在TNF KO模型中，治疗后16小时开始单个死亡，所有这些死亡在治疗后30小时死亡。这是前所未有的，在这种程度上，通过敲除骨髓中的各种细胞因子来观察到不同类型的肝脏损伤，将来我们计划研究具有影响的细胞因子的途径，以阐明肝脏损伤的机制。