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低分子量Rap2B GTPaseによる新規エンドサイトーシス制御機構

低分子量 Rap2B GTPase 的新型内吞控制机制

基本信息

批准号：
20K07245
负责人：
江上洋平
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの機能解析からRap2BはFcγレセプター介在性ファゴサイトーシス経路において、ファゴゾームの形成に関与することが示唆されている。新生ファゴゾームの近傍で形成されるRap2B陽性エンドサイトーシス小胞の特性を明らかにするためには、細胞内でのRap2Bの活性化状態を知ることが極めて重要であると思われる。そこで本年度は、適切なRap2Bの活性化トレーサーの選定、並びにファゴサイトーシス・局所性エンドサイトーシス小胞上でのRap2Bの活性化状態の検討を行った。Rap2BのGTP結合型に結合するRalGDSを用いて、Rap2BのGTP結合型（TagRFP- Rap2B-G12V）或いは、Rap2BのGDP結合型(TagRFP- Rap2B-S17N)とGFP-RalGDSの細胞内局在を比較検討したところ、RalGDSは主に細胞内の小胞において、Rap2B-G12Vによる発現量依存的な共局在を示した。このことから、RalGDSは活性化型Rap2Bの局在を知る上で、有用なトレーサーであることがわかった。次に、Fcγレセプター介在性ファゴサイトーシス経路でのRalGDSの細胞内局在について調べた。蛍光ライブセル観察を行ったところ、RalGDSはPlasma Membrane（PM）には少なく、形成された細胞内ファゴゾームとファゴゾームの近傍で形成される新生エンドサイトーシス小胞に時間の経過と共に集積することが明らかとなった。Rap2BのGDP結合型が貪食を抑制することを踏まえると、Rap2Bの活性化はファゴゾームの形成を促進し、さらに、細胞内ファゴゾーム・局所性エンドサイトーシス小胞の成熟でも機能する可能性が考えられる。

The function analysis of this paper is to analyze the relationship between Rap2B and Fcγ-ray radiation in the medium, and to analyze the relationship between Rap 2B and Fc γ-ray radiation. It is very important to know the activity state of Rap2B in cells. This year, we selected the appropriate Rap2B activation server and discussed the activation status of Rap2B on the cell. Rap2B GTP-binding RalGDS is used in the middle, Rap2B GTP-binding (TagRFP- Rap 2B-G12V) or middle, Rap 2B GDP-binding (TagRFP- Rap 2B-S17N) and GFP-RalGDS are used in the middle, RalGDS is used in the middle of the main cell, Rap 2B-G12V is used in the middle, Rap 2B GDP-binding (TagRFP-Rap 2B-S17N) and GFP-RalGDS are used in the middle, RalGDS is used in the main cell, and Rap 2B-G12V is used in the middle. RalGDS is an active Rap2B. In addition, the Fcγ-protein is regulated by the intracellular regulation of RalGDS in the sexual system. The Plasma Membrane (PM) is formed by the plasma membrane, and the plasma membrane is formed by the plasma membrane. Rap2B GDP-binding inhibition of gluttony, activation of Rap2B, promotion of cell formation, intracellular cell maturation, and the possibility of cell maturation.