权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

多様なトロゴサイトーシスモデルを用いた侵襲的相互作用による情報伝達機構の解明

使用各种吞噬作用模型阐明侵入性相互作用的信息传递机制

基本信息

批准号：
21KK0139
负责人：
津久井久美子
金额：
$ 12.15万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-10-07 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

動物細胞トロゴサイトーシスモデル確立に向けて、バージニア大学にて動物細胞を用いた貪食アッセイ方法の研修を行った。CHO細胞の亜株であるLR73細胞を貪食細胞とし、アポトーシス細胞のFACSによる貪食アッセイ方法を学んだ。ここではUV照射によりアポトーシスを誘導したJurkat細胞をpH感受性の色素で染色し、酸性化貪食胞に由来するシグナルを検出した。技術の習得が完了した。また、LR73をエサとしてもわずかではあるがシグナルが観察されたことから、生細胞の取り込が起こる可能性が考えられた。赤痢アメーバにおけるトロゴサイトーシスの目的の一つが表面分子のCross-dressであるなら、その効率は病態が異なる臨床分離株で多様である可能性がある。これを評価するため、Cross-dress検出方法を検討した。赤痢アメーバ標準株(HM1:IMSS cl-6)とJurkat細胞を30分共培養した後、膜透過性処理をせず、抗MHC class I(MHCI)抗体、続いて二次抗体で処理し、FACSにて解析を行った。細胞サイズと複雑性のパラメータから赤痢アメーバの集団を規定し、この細胞集団をさらにFL1とFL4で展開した。FL1（緑）は自家蛍光を持つ赤痢アメーバのみ陽性となり、FL4（遠赤外）で抗MHCI抗体シグナルを評価した。この結果、FL1、FL4共に陽性の集団にFL4強陽性、弱陽性の二集団が観察された。FL4強陽性集団は取り込み途中で接着状態にあるJurkatからのシグナルが影響していると考えられ、FL4弱陽性の集団がCross-dress集団と考えられた。赤痢アメーバにおける既知のトロゴサイトーシス阻害剤であるガラクトースでCross-dressが低下したことから、この集団をCross-dress群として評価することとした。Cross-dress評価方法が確立された。

Animal cells are used to study the method of gluttony. CHO cell line LR73 cell line This is the first time that UV radiation has been used to induce pH-sensitive staining and acidification of gluttonous cells. Technology acquisition is complete. LR73 is the first to be examined for the possibility of cell acquisition. The Cross-dress of surface molecules and the possibility of multiple clinical isolates are different. This article discusses the methods of Cross-dress detection. After 30 minutes of co-culture with Jurkat cells, membrane permeability treatment, anti-MHC class I(MHCI) antibody, secondary antibody treatment and FACS analysis were performed. The cell population is regulated by the complex nature of the cell population, and the cell population is expanded from FL1 to FL4. FL1 (green) is a positive indicator for anti-MHCI antibodies and FL4 (far red) is a positive indicator for anti-MHCI antibodies. The results showed that FL1 and FL4 were positive groups, FL4 was strong positive group and FL4 was weak positive group. FL4 strong positive group is in the middle of the next state, FL4 weak positive group is in the middle of the cross-dress group, FL4 weak positive group is in the Cross-dress group. The cross-dress group is composed of two groups, namely, the Cross-dress group and the Cross-dress group. Cross-dress evaluation method has been established.