A novel strategy by PARP inhibitors for sporadic breast cancers

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2022年度は以下の項目に関して研究を行った。a) 乳腺特異的GANP欠損による乳腺上皮にゲノム不安定性にはBRCA2発現低下が関与するかの検証: 引き続きBRCA2遺伝子のクローニングを継続して行 い、long PCRによりタンパク翻訳領域のクローニングを終了し、発現ベクターへ組み込んだ。ヒト乳がん細胞株MCF7での発現を確認したが、非常に活現レベルが低く、トランスジェニックマウス作成へと進むことは困難と判断した。b) GANPは標的分子BRCA2をどのように制御しているかの検証: ヒト乳癌細胞株MCF7を用いてHATドメイン欠失変異体の作製を試み、まだ途中ではあるが候補クローンの樹立に成功した。最終的にシングルクローンを単離することを行う予定である。GANP遺伝子からHATドメインを欠失させた変異体を作製し、それを過剰発現する細胞株と全長GANP遺伝子を発現させたコントロール細胞との間で遺伝子発現解析を行い、候補遺伝子を同定し、一つはThrombomodulinであった。この分子が実際に乳がん組織で発現しているのかを解析する。c) 乳癌組織検体においてGANPの発現とBRCA2の発現に相関がみられるのかの検証: 抗BRCA2抗体による免疫染色の条件が決定できたため、非遺伝性散発性乳癌の臨床検体を用いて解析したが、両者の発現には明らかな相関は得られていない。d) GANP発現抑制細胞においてPARP阻害剤の効果の検証: 細胞のsphere形成によりPARP阻害剤の効果をみようと考えたが、残念ながらsphere形成がみられない細胞であった。MTTアッセイで十分に効果がみられることが明らかになり、GANPノックダウン細胞を樹立している。この実験に関しては、現在乳癌細胞株と卵巣癌細胞株を用いて行っている。