B細胞抗原レセプター関連分子p52に結合する分子の解析

与B细胞抗原受体相关分子p52结合的分子分析

• 批准号: 07770243
• 负责人: 桑原 一彦
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770243/
• 关键词: B細胞; シグナル伝達; チロシンキナーゼ

B細胞抗原レセプターシグナル伝達機能分子p52に対するモノクローナル抗体19-14を用いて単離したα4遺伝子はそのアミノ酸配列から、既知のキナーゼドメインは有しないものの、protein kinase C、casein kinase IIによってリン酸化を受けると思われる部位が5ヶ所づつ存在する。α4遺伝子をpGEX-3Xベクターに組み込み、大腸菌内でGSTとの融合タンパクとして発現させ、GST-α4がprotein kinase Cとcasein kinase IIの精製酵素によってin vitroでリン酸化の基質となるかを検討した。その結果、GST-α4はin vitroで両方の酵素のリン酸化基質となることが明らかとなった。次に、α4遺伝子産物の機能ドメインを明らかにする目的で、5'側及び3'側欠失変異体を5種類づつ計10種類作製し、各々をGSTとの融合タンパクとして発現させた。これらの遺伝子産物を抗ホスホチロシン抗体によるウェスタンブロット解析を行うと、完全長のGST-α4は大腸菌内でチロシンリン酸化を受けており、さらに欠失変異体の解析から、このチロシンリン酸化にはC末端側60〜70アミノ酸が必要であることが明らかとなった。大腸菌内にチロシンキナーゼは存在しないという報告より、α4遺伝子産物にはチロシンキナーゼ活性を有する可能性があり、今までに報告されていない新しいタイプの機能分子として解析を行っている。

B cell antigen protein kinase II protein kinase C protein kinase II proteinα4-protein kinase pGEX-3X is a protein that can be expressed in E. coli, GST and fusion proteins, GST-α4 protein kinase C and casein kinase II are purified in vitro and acidified in vitro. GST-α4 is the enzyme in the vitro. In addition, the function of α4 gene products is different from that of α 4 gene products. There are 5 kinds of fusion genes, 10 kinds of fusion genes, and 5 kinds of fusion genes. The protein product of this gene is anti-GST-α4 antibody, and the protein analysis is carried out. The complete GST-α4 protein is acidified in Escherichia coli. The protein analysis is carried out. The protein acidification is 60 ~ 70 amino acids at the C-terminal side. It is reported that there is a possibility of the existence of a new functional molecule in Escherichia coli.