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痛み行動の性差発現における分界条床核背外側CRHニューロンの役割

纹状体核背外侧CRH神经元在疼痛行为性别差异表达中的作用

基本信息

批准号：
20K07747
负责人：
萩原裕子
金额：
$ 2.83万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究で、痛み刺激としてホルマリンテストを行い、一度痛みが抑制される時期に性差が認められること、その時期に分界条床核外側部で雌性特異的にCREBのリン酸化が起こることを明らかにした。また、同部位はCorticotropin-releaseing hormone(CRH)ニューロンが局在している特異的な場所でもある。本研究の目的は、分界条床核外側部のCRHニューロンが、痛み行動の性差発現にどのような役割を演じているか、を検討することにあり、遺伝子改変動物とウィルスベクターを組み合わせて利用し、オプトジェネティクスやTRECKの変法などの神経細胞に選択的な操作技術を用いる。性差発現は、ホルマリンテストによる痛み反応の場合、中間相という限定した時間にのみ顕著なため、オプトジェネティクスなどの時間分解能に優れた方法が有効となる。本研究ではCRH-Creラット（RRRC#00852)を使用し、分界条床核外側部におけるCRHニューロンを選択的に操作することにより、ホルマリンテスト行動への変容について検討した。ラットの分界条床核外側部に脳定位固定装置を用いて、AAV-EF1a-DIO- hChR2(C128s/D156A)-EYFP 、AAV-EF1a-DIO-eNpHR3.0-EYFP を投与し、同時に、光ファイバーの先端を固定した。手術１ヶ月後、ホルマリンテストを行い、光ファイバーの先端から特定波長の光を照射しCRHニューロンを興奮、もしくは抑制させ、行動の変化を観察する予定であった。しかし、使用したウィルスの発光力が弱く感染した細胞がCRHニューロンであるかどうかの同定が難しくなった。そのため、使用するウィルスを再検討する必要があり時間を要し2022年度が終了した。

In this study, the female CREB in the outer part of the nucleus of the bed was acidified. Corticotropin-releasing hormone(CRH) is a special kind of hormone. The purpose of this study is to investigate the application of the techniques for the selection of neural cells in animals modified by CRH in the outer part of the CRH nucleus. The time resolution method of the intermediate phase can be used to optimize the performance of the system. In this study, CRH-Cre (RRC #00852) was used to determine the operation of CRH selection in the outer part of the CRH bed nucleus. The positioning and fixing device for the outer part of the dividing strip core is used, AAV-EF1a-DIO-hChR2 (C128s/D156A)-EYFP, AAV-EF1a-DIO-eNpHR3.0-EYFP are projected, simultaneously, and fixed at the tip of the light. 1 month after surgery, the light source is irradiated with specific wavelengths of light, the excitation is suppressed, and the movement is observed. It is difficult to infect cells with light and stability. The year 2022 will be the end of the year.