脂肪組織由来間葉系幹細胞-造血幹細胞における代謝経路解析：抗加齢作用に注目して

脂肪组织来源的间充质干细胞和造血干细胞的代谢途径分析：聚焦抗衰老作用

• 批准号: 20K08721
• 负责人: 中山 享之
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08721/
• 关键词: 血液凝固; 脂肪組織由来間葉系幹細胞; 造血支持能力; Ebf3; shRNA; ノックダウン; 脂肪細胞分化; 骨髄造血微小環境; 間葉系幹細胞; メタボローム解析

我々は、脂肪組織由来間葉系幹細胞（ADSC）が骨髄由来間葉系幹細胞（BMSC）よりも造血支持において優れていることを見出した。両者における遺伝子発現の差異を解析することによってどの遺伝子が造血に強く関与しているか同定するのは、容易と思われた。しかしながらこれまでの報告によれば、造血に直接作用するSCFやG-CSFといったサイトカインやVCAM-1等の接着因子の発現量は、ADSCとBMSCにおいて、ほぼ同等であった。そこで代謝経路に着目して解析を進めた。これまでの研究では、骨髄nicheと考えられている間葉系幹細胞（CAR細胞と名付けられている）においては転写因子Ebf3が豊富に発現されており骨芽細胞への分化を防ぐことにより造血支持能を維持することが報告されている。そこで、我々は、まずADSCとBMSCを脂肪細胞ならびに骨芽細胞誘導培地にて培養し分化の程度をvon Kossa染色とオイルレッドO染色にて評価した。BMSCは、脂肪細胞と骨芽細胞に分化したが、ADSCにおいては脂肪細胞への分化は認められたが、骨芽細胞にはほとんど分化しなかった。そこでADSCにおけるEbf3の発現をsemi quantitative PCRにて確認したところ豊富に発現していた。そこでADSCにおけるEbf3をshRNAにてノックダウンして機能の解析を試みた。しかしながら一過性トランスフェクションによるノックダウンはうまく機能しなかった。そこで、方針転換を行い組織修復を促進する血液凝固作用に関するADSCの作用について解析を行なっている。ADSCは、BMSCよりも強い血液凝固作用を有することを見出した。ヒト血漿-ADSC-造血幹細胞の混合培養系や、抗凝固剤を用いながらマウスへのADSC投与実験を行い、造血支持能力に対する作用を解析する予定である。

Subcutaneous adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSC) and bone-derived mesenchymal stem cells (BMSC) are used for hematopoietic support. The differences in the development of the genes in the human body are analyzed. The genes in the human body are strongly related to the development of the human body. The expression of adhesion factors such as SCF G-CSF and VCAM-1, ADSC and BMSC, etc. Metabolic pathway analysis This study was conducted to investigate the expression of Ebf3 in mesenchymal stem cells (CAR cells) and to investigate the maintenance of hematopoietic support in mesenchymal stem cells. The degree of differentiation of adipocytes and bone buds induced by culture was evaluated by von Kossa staining and O-staining. BMSC, adipocyte and bone bud differentiation, ADSC, adipocyte differentiation, bone bud differentiation The detection of Ebf3 in ADSC was confirmed by semi quantitative PCR. Analysis of ADSC's Ebf3 shRNA function It's just a matter of time. Analysis of the role of ADSC in promoting tissue repair and blood coagulation ADSC and BMSC have a strong blood coagulation effect. The effect of plasma-ADSC-hematopoietic stem cell mixed culture system, anti-coagulation agent on ADSC administration and hematopoietic support ability was analyzed.

项目成果

Pretreatment Immature Platelet Fraction as a Surrogate of Reticulated Platelets Predicts the Response to Corticosteroids in Adults with Immune Thrombocytopenia

• DOI: 10.1159/000510460
• 发表时间: 2021-05-01
• 期刊: ACTA HAEMATOLOGICA
• 影响因子: 2.4
• 作者: Takami, Akiyoshi;Mizuno, Shohei;Hanamura, Ichiro
• 通讯作者: Hanamura, Ichiro