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ホスホイノシチド動態制御を介したヒトパピローマウイルス潜伏感染機構の解明

阐明磷酸肌醇动力学调节介导的人乳头瘤病毒潜伏感染机制

基本信息

批准号：
20K09682
负责人：
柊元巌
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09682/
关键词：
HPV PTEN ホスホイノシチド NFκB ヒトパピローマウイルス子宮頸がん

项目摘要

HPV16ゲノムを保持するU2OS/HPV16細胞では、親株U2OS細胞と比べて細胞内PIP3レベルが低下したことから、HPVタンパク質がホスホイノシチド代謝酵素に影響を与える可能性を検討した。HEK293細胞にHPVのE1タンパク質を一過性に過剰発現させると、PIP3ホスファターゼであるPETNの発現レベルが減少した。一方、ATPase活性を欠失したE1変異体（K483A）ではPTENレベルに変化は見られなかった。内在性PTENを発現していないヒト子宮頸癌細胞C33AでFLAG-PTENを発現させてE1の効果を調べたところ、HPV16, HPV18, HPV58のE1発現によって、FLAG-PTENの発現がほぼ完全に消失した。E1によるPTEN分解が示唆されたことから、プロテアソーム阻害剤（MG132）及びオートファジー阻害剤（bafilomycin A1）の添加を検討したところ、いずれの阻害剤の処理下でもE1によるFLAG-PTENの消失が認められた。またHEK293細胞でE1とPTENの物理的相互作用をco-immunoprecipitationにより検討したが、E1とPTENの結合は検出されなかった。HPV16初期遺伝子の発現が細胞内ホスホイノシチドに与える影響について解析を行った。HEK293細胞にHPV16初期遺伝子（E1, E2, E4, E5, E6, E7）の発現プラスミドを導入して、一過性に発現させた。陽性コントロールとして、PTEN発現プラスミドを導入したHEK293細胞を用いた。プラスミド導入から2日後に細胞を回収して、LC-MS/MS質量分析により細胞内のホスホイノシチド分子種の検出・定量を行った。HEK293細胞ではE1発現により細胞内のPTENが減少することから、E1発現により細胞内PIP3レベルが上昇することを予想したが、いずれのHPV遺伝子の発現によっても顕著な細胞内ホスホイノシチド分子種の量的変動は検出されなかった。一方、陽性コントロールのPTEN発現細胞ではPIP3レベルの減少が認められた。E1発現による内在性PTENの減少が十分でない可能性が考えられた。

To investigate the possibility of HPV16 gene expression in U2OS/HPV16 cells and their parent U2OS cells, as well as the effects of HPV 16 gene expression on the expression of PIP3 in U2OS/HPV 16 cells and their parent U2OS cells. HEK293 cells were infected with HPV E1 protein and decreased in PETN protein expression. One side, ATPase activity is missing E1 variant (K483A). The expression of intrinsic PTEN in cervical cancer cells C33A, FLAG-PTEN, E1, HPV16, HPV18, HPV58, E1 and FLAG-PTEN disappeared completely. E1: The decomposition of FLAG-PTEN in the presence of a protective agent (MG132) and a protective agent (bafilomycin A1). HEK293 cells E1 and PTEN physical interaction co-immunoprecipitation The development of HPV16 early stage gene is the key to the analysis of intracellular diseases and their effects. HEK293 cells were infected with HPV16 early genes (E1, E2, E4, E5, E6, E7) and the expression of these genes was detected transiently. PTEN was introduced into HEK293 cells. 2 days after the introduction, the cells were recovered, and LC-MS/MS mass analysis was performed to detect and quantify the molecular species in the cells HEK293 cells E1 expression decreased, E1 expression increased, PIP3 expression increased, HPV gene expression increased, and the amount of intracellular PTEN gene increased. One of the positive PTEN cells was found to have decreased PIP3 activity. E1 appears to be intrinsic PTEN and decreases in probability.

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

HPV18型陽性子宮頸部小細胞癌のオルガノイド樹立オルガノイドが切り拓く希少癌個別化医療

建立治疗 HPV 18 型阳性子宫颈小细胞癌的类器官类器官为罕见癌症的个性化医疗开辟了道路

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
日下部美佐子;田口　歩;谷川道洋;星　大輔;豊原佑典;河田　啓;曾根献文;柊元　巌;織田克利;筆宝義隆;大須賀　譲
通讯作者：
大須賀　譲

日本人女性から分離されたHPV67の全ゲノム解析

从日本女性体内分离出的 HPV67 病毒的全基因组分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
小暮剛太;小貫麻美子;岩田　卓;松本光司;柊元　巌
通讯作者：
柊元　巌

ヒトパピローマウイルス感染による発がんとAPOBEC変異導入の関連

人乳头瘤病毒感染引起的癌变与APOBEC突变引入的关系

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fujii Takuma;Kawahara Rina;Kukimoto Iwao;Ichikawa Ryoko;Miki Michiyasu;Kanao Serika;Nomura Hiroyuki;Torii Yutaka;Iwata Aya;根岸靖幸;柊元　巌
通讯作者：
柊元　巌

日本人女性でのHPV18ゲノム配列の分子疫学解析

日本女性HPV18基因组序列的分子流行病学分析