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The mechanism of differentiation of periodontal tissue with the long-term organ culture system.

长期器官培养系统的牙周组织分化机制。

基本信息

批准号：
20K10000
负责人：
寺島達夫
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tsurumi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10000/
关键词：
歯根膜形成器官培養法分化誘導歯周組織再生

项目摘要

顎骨骨膜由来成分を含まない胎生16.5日齢のマウス臼歯と、歯胚の最外層の歯小嚢に骨膜由来成分が固着した胎生17.5日齢以降のマウス臼歯を用いて、最長10週間の長期間器官培養法を行った。胎生16.5日齢の臼歯歯胚の器官培養法では形成された歯根の表面にセメント質および歯根膜の形成が認められ、歯根に面した部位に歯槽骨の形成は認められなかった。歯小嚢に顎骨の骨膜由来成分が付着した胎生17.5日齢以降の長期間器官培養では、形成された歯根にはセメント質および歯根膜線維の形成と歯根に面した部位の一部には骨形成が認められた。歯胚の長期間器官培養には、培地に添加する血清の性質が重要な影響を与えるため、9種類の新規の血清のロットチェックを行い、従来の血清と同様な培養結果を示す血清を選定できた。この血清を用いた歯胚の長期間器官培養を予定していたが、歯胚の器官培養に必須なるBGJｂ培地の購入が新型コロナウイルス感染症の影響により著しい遅延が生じ、臼歯歯胚の長期間培養は本研究期間内に4回のみ実施でき、培養歯胚には歯根形成とセメント質と歯根膜の形成が確認できた。また、PCRを用いて器官培養中の歯胚における歯根膜のマーカーとしてのPLAP1, Periostin, Scleraxisの発現を観察し、培養期間に応じて増加していることを確認できた。歯周組織の由来を明確にするため、GFP遺伝子組み換えマウスの歯胚を用いて移植実験を行った。移植実験は胎生17日齢のC57BL/6-Tgマウスの歯胚をC57BL/6マウス背部皮下に移植した。移植４週後に、移植片を取り出し、組織学的観察により、歯根形成が認められ、セメント質と歯根膜と移植歯胚周囲の骨組織の形成が確認できた。移植歯胚の歯周組織の由来を検索するため、GFPに対する免疫組織学的観察行う予定であったが、研究期間内に実施できなかった。

The periosteal component of the jaw bone was fixed at 16.5 days after birth, and the outer layer of the tooth embryo was fixed at 17.5 days after birth. The organ culture method of 16.5-day-old dental embryo was used to form the surface of dental root and the formation of dental root membrane. The formation of dental groove bone on the surface of dental root was also recognized. The origin of the periosteum of the jaw bone was observed at 17.5 days after birth, and the formation of the tooth root was observed at the same time. The characteristics of serum added during long-term organ culture of tooth embryo are important to the selection of serum. The long-term organ culture of dental embryos with serum is expected to be stable during the study period. The purchase of BGJb culture site is necessary for organ culture of dental embryos. The effect of new type of dental infection is also discussed. The long-term culture of dental embryos is confirmed during the study period. The development of PLAP1, Periostin, Scleraxis in dental embryos in culture was observed and confirmed by PCR. The origin of peripheral tissues is clearly defined, and GFP gene sub-groups are transformed into peripheral tissues. Transplantation of C57BL/6-Tg embryos at 17 days of gestation was carried out subcutaneously on the back of the fetus. Four weeks after transplantation, when the graft was taken out and histological observation was performed, the formation of the dental root was confirmed, and the formation of the dental root material, the dental root membrane, and the bone tissue around the transplanted dental embryo was confirmed. The origin of embryonic tissue transplantation, GFP and immunohistologic observation were determined and performed during the study.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

骨抽出物中に含まれる石灰化誘導因子の同定

骨提取物中矿化诱导因子的鉴定

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nakano Kosuke;Kubo Hirohito;Nakajima Masahiro;Honda Yoshitomo;Hashimoto Yoshiya;齊藤悠，山本竜司，大熊理紗子，唐木田丈夫，白井麻衣，山越康雄
通讯作者：
齊藤悠，山本竜司，大熊理紗子，唐木田丈夫，白井麻衣，山越康雄

Combined Effect of Midazolam and Bone Morphogenetic Protein-2 for Differentiation Induction from C2C12 Myoblast Cells to Osteoblasts