皮膚障害発現機序の解明によるボリコナゾールの至適投与設計法の開発
通过阐明皮肤损伤发展机制开发伏立康唑最佳剂量设计方法
基本信息
- 批准号:20K16041
- 负责人:
- 金额:$ 2.75万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
- 财政年份:2020
- 资助国家:日本
- 起止时间:2020-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
令和4年度は、前年度までに行っていたケラチノサイトを用いたVRCZ、VNO、P-VNOおよびPD-VNO添加による細胞障害性についての評価の検討を進めた。前年度までの課題としては、細胞実験において設定した条件で、P-VNOとPD-VNOの細胞障害性が真に同程度か否か判別できていないことが課題であった。課題解決のため、前回実験で得られた各条件下の残液をLC-MS/MSにより測定を行うこととした。結果としては、P-VNOを想定した条件下の残液中にはPD-VNOが含まれていることが確認され、細胞実験の条件見直しの必要性が考えられた。条件は現在検討中であるが、以下の条件にて再試験を行う予定である。正常ヒト表皮角化細胞(NHEKs) を、 HuMedia-KG2 (KG2) 培地を用いて96穴マイクロプレートに播種。NHEKsは濃度既知のVNOを含有するKB2培地に交換した後、UVB照射、熱処理の条件を設定し、P-VNOおよびPD-VNOの産生を想定した場合分けを行う。この熱処理条件設定の際に、前回までは熱処理しない群は常温下の条件であったが、これを氷冷上とすることによりP-VNOからPD-VNOへの変換を制御する。その後、それぞれに8J/cm2のUVAを曝露。なお、UVA未曝露群は、アルミ箔にてカバーすることで UVAを完全に遮蔽。UVA曝露後、33μg/mL neutral red (NR) 含有 KB2培地にて2時間培養した後、30%エタノール含有0.1 mol/L HCl溶液を用いてNRを抽出。細胞数の指標は、抽出液の吸光度を測定し、試験試料未処理細胞 (N.C.) を100とした場合の相対値で表す。
In the fourth year of Linghe and the previous year, we will conduct an evaluation and discussion on the cell damage caused by the addition of VRCZ, VNO, P-VNO and PD-VNO. In the past year, the problem was to set the conditions for cell development, and to determine whether the cell damage of P-VNO and PD-VNO was true or not. To solve this problem, we obtained the residual solution under various conditions by LC-MS/MS. The results showed that PD-VNO was present in the residual solution under the condition of P-VNO concentration, and the necessity of cell culture was examined. The following conditions are required to be met: Normal epidermal keratinocytes (NHEKs) and HuMedia-KG2 (KG2) were cultured and seeded in 96 holes. NHEKs concentration is known, VNO content is known, KB2 exchange is performed, UVB irradiation and heat treatment conditions are set, and P-VNO and PD-VNO generation are determined. When the heat treatment conditions are set, the heat treatment conditions at room temperature are controlled. The UVA exposure is 8J/cm2. UVA is not exposed to light, and UVA is completely shielded. After UVA exposure, 33μg/mL neutral red (NR) containing KB2 was cultured for 2 hours. After incubation, 30% neutral red (NR) containing 0.1 mol/L HCl was extracted with NR. Cell count index, absorbance of extract, test sample untreated cells (N.C.) 100 to 100 degrees.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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