肺高血圧症の病態におけるインスリン分泌促進ホルモン、その分解酵素の役割は？

胰岛素促分泌剂及其降解酶在肺动脉高压病理学中的作用是什么？

• 批准号: 20K16885
• 负责人: 細川 奨
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16885/
• 关键词: 肺高血圧症; DPP-4阻害薬; caveolin-1; GLP-1受容体作動薬; DPP-4; GLP-1

本研究は、インスリン分泌促進ホルモンであるGLP-1、およびその分解酵素DPP-4が、肺高血圧症の病態に果たす役割を検討し、これらの薬剤の肺高血圧症への治療薬としての可能性を探るものである。2020年度はin vivoでのデータを中心に検討した。モノクロタリン誘発肺高血圧ラットを用いて、GLP-1受容体作動薬、DPP-4阻害薬が肺高血圧症を改善すること、特にこれら２剤の併用が最も生存率が高めることを確認した。続いて研究実施計画に基づき、2021年度は以下の検討を行った。（１）T細胞と肺動脈平滑筋細胞の直接の相互作用の可能性の検討：Flagタグ付きDPP-4プラスミド、およびDPP-4変異プラスミドを作成し、これをHEK293細胞に遺伝子導入、ライセートを作成したのち、肺動脈平滑筋細胞と免疫沈降を行った。この結果、DPP-4と直接作用するのは、肺動脈平滑筋細胞上のcaveolin-1であることが明らかになった。このことから、肺動脈平滑筋細胞の増殖に、CD26・caveolin-1系の相互作用が関与しているという仮説を立て、以下の実験を行なった。（２）T細胞と肺動脈平滑筋細胞の共培養：FGF2で刺激した肺動脈平滑筋細胞とJurkat-CD26細胞株を共培養したところ、Jurkat-parent株との共培養に比べ強い細胞増殖を示す傾向を認めた。2022年度は、実験の進捗状況を考慮し、DPP-4阻害薬を用いて以下の検討を行った。（１）免疫組織化学染色：ラット（コントロール群、モノクロタリン誘発肺高血圧群、モノクロタリン＋DPP-4阻害薬群）の３群を用いて、NF-kB リン酸化p65を比較したところ、モノクロタリン群で優位に肺動脈平滑筋細胞に一致したリン酸化p65の発現増強を認めた。（２）タンパク発現：ヒト肺動脈平滑筋細胞を用いて、TGF-βあるいはFGF2で刺激し、DPP-4阻害薬を投与したところ、リン酸化p65のタンパク発現量はDPP-4阻害薬の濃度依存性に抑制された。

This study aims to explore the role of GLP-1, DPP-4, a catabolic enzyme in the secretion of essential oils, in the pathogenesis of pulmonary hypertension, and in the treatment of pulmonary hypertension. In 2020, we will focus on the development of new technologies. The combination of GLP-1 receptor activator and DPP-4 inhibitor can improve pulmonary hypertension, and the survival rate is high. The research and implementation plan is based on the 2021 annual review. (1) A study of the possibility of direct interaction between T cells and pulmonary smooth muscle cells: Flag type DPP-4 receptor, DPP-4 receptor, HEK293 cell gene introduction, receptor, pulmonary smooth muscle cells and immune sedimentation. As a result, DPP-4 acts directly on caveolin-1 in smooth muscle cells of the lungs. The interaction between CD26 and caveolin-1 is related to the proliferation of smooth muscle cells in pulmonary arteries. (2) Co-culture of T cells and pulmonary smooth muscle cells: FGF2 stimulated co-culture of pulmonary smooth muscle cells and Jurkat-CD26 cells, Jurkat-parent cells and co-culture of T cells and pulmonary smooth muscle cells showed stronger proliferation tendency than that of normal cells. In 2022, we will consider the progress of DPP-4 and discuss the following issues. (1) Immunohistochemical staining: The expression of NF-kB protein p65 in the three groups of RATS (RATS, NF-kB, NF-kB, NF- (2) The expression of TGF-β in smooth muscle cells of pulmonary artery was inhibited by FGF2, DPP-4 inhibitor and DPP-4 inhibitor in a concentration-dependent manner.