Nuclear in situ metabolisms and nuclear receptors.

これまで， C2C12細胞を細胞質と核に分画し、脂質成分を抽出して詳細な質量分析を行った。そして、 Phosphatidylcholine (PC)、Phosphatidylethanolamine (PE)、lysoPC、lysoPE、Sphingomyelin、Ceramide etc まで拡大して核脂質成分を同定し、リスト化、 データベース化することができた。昨年度から，この中でもSphingolipid に注目し，その代謝，トランスポーターに関連し，細胞への力学刺激で発現が 大きく変動する因子を同定して解析を行なった。この因子は，exosome を介した細胞外放出にも関連し，exercise hormone transporter としての機能が見込まれる。 本年度，この因子が，特定のエネルギー代謝調節性核内受容体受容体ERRa/bに対して強力な転写抑制効果を持つことが明らかとなった。このトランスポーターは，ERRa，ERRb 特異的であった。また，本年度は，このトランスポーターのドメイン解析を行い，ERR転写制御に関与するドメインを決め，脂質結合ドメインをそのアミノ酸構造比較から予測した。そして，これらの機能ドメインを欠失させた変異体に，ERR調節昨日が無くなることも確認した。また，本年度はこのドメインに結合する脂質を同定する方法を樹立する目的で，大腸菌に変異体を含むトランスポータータンパク質を発現させ，精製する条件を検討し，一定の条件を確定し，次年度，質量分析によって，核内脂質のうち，このトランスポーターに結合し得る脂質を同定する基盤を作った。また，エネルギー代謝調節因子として核内脂質以外にspermidine（SPD）を同定し，SPD結合タンパク質を行い，mitochondria Trifunctional Protein，ほか3種を同定した。

これまで， C2C12細胞を細胞質と核に分画し、脂質成分を抽出して詳細な質量分析を行った。そして、 Phosphatidylcholine (PC)、Phosphatidylethanolamine (PE)、lysoPC、lysoPE、Sphingomyelin、Ceramide etc まで拡大して核脂質成分を同定し、リスト化、 データベース化することができた。昨年度から，この中でもSphingolipid に注目し，その代謝，トランスポーターに関連し，細胞への力学刺激で発現が 大きく変動する因子を同定して解析を行なった。この因子は，exosome を介した細胞外放出にも関連し，exercise hormone transporter としての機能が見込まれる。 本年度，この因子が，特定のエネルギー代謝調節性核内受容体受容体ERRa/bに対して強力な転写抑制効果を持つことが明らかとなった。このトランスポーターは，ERRa，ERRb 特異的であった。また，本年度は，このトランスポーターのドメイン解析を行い，ERR転写制御に関与するドメインを決め，脂質結合ドメインをそのアミノ酸構造比較から予測した。そして，これらの機能ドメインを欠失させた変異体に，ERR調節昨日が無くなることも確認した。また，本年度はこのドメインに結合する脂質を同定する方法を樹立する目的で，大腸菌に変異体を含むトランスポータータンパク質を発現させ，精製する条件を検討し，一定の条件を確定し，次年度，質量分析によって，核内脂質のうち，このトランスポーターに結合し得る脂質を同定する基盤を作った。また，エネルギー代謝調節因子として核内脂質以外にspermidine（SPD）を同定し，SPD結合タンパク質を行い，mitochondria Trifunctional Protein，ほか3種を同定した。