肝内型マラリア原虫における寄生胞膜を介した生存戦略の解明

通过寄生囊泡膜阐明肝内疟原虫的生存策略

• 批准号: 20K22768
• 负责人: 福本 隼平
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22768/
• 关键词: マラリア原虫; 寄生胞膜; BioID; TurboID; miniTurbo; ハイジャック機構; 肝内期

当初の計画では、ネズミマラリア原虫(P.berghei)でBioIDタグを付加したEXP1を過剰発現させて、原虫の寄生胞膜タンパク質を網羅的に同定する予定であった。しかし、BioIDと比較して短時間でビオチン化を行えるTurboID、miniTurboにタグを変更することにした。これにより経時的にタンパク間相互作用を調査することができる。感染の前期・中期・後期でPVMに局在するタンパクは変化すると考えられるため、TurboID、miniTurboを使用することによって、より詳細なPVMタンパクの全体像を捉えることができる。またはじめに、肝内期原虫と比較して実験試料の調製が容易な、赤内期原虫(P.falciparum)を使用してビオチン化実験を行うこととした。これにより、ビオチン化実験に最適な実験条件を探索することが可能であり、肝内期原虫のビオチン化実験をより円滑に行うことができる。一年目は、赤内期原虫(P.falciparum)のEXP1にminiTurboを付加した融合タンパク質をエピソーマルに過剰発現するプラスミドの構築を行った。また、過剰発現させた場合にタンパクによっては細胞毒性を示す可能性があるため、EXP1のC末端にminiTurboを付加したコンストラクトの作成も同時に開始した。これらのコンストラクトを使用して、先行研究で明らかになっているPVMタンパクを同定できるか確かめる予定である。また、EXP1の配列を他のタンパクコード配列に置換することで赤内期におけるタンパク間相互作用の新規研究ツールとして利用できる。

The original plan was to explicitly discover EXP1 for the addition of BioID tags to the P. berghei parasite and to establish the same conditions for the inclusion of the parasite's parasitic membrane protein. TurboID, miniTurbo, etc. The interaction between the two groups was investigated. The PVM is used in the early, middle and late stages of infection. It is easy to prepare the sample by comparison with P. falciparum. It is easy to use P. falciparum. The optimal conditions for the development of liver parasites are explored. A year later, the Exp1 miniTurbo of P. falciparum was constructed. In case of overshooting, the possibility of cytotoxicity is shown. The C terminal of EXP1 is added to the system. The PVM is designed to be used in advance of research. A New Study on the Interaction between Exp1 and Exp 1 in the Red Period