Studies on the regulatory mechanism of aggresome formatiion and clearance

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テーマ１：ユビキリンのLLPSとSO286によるアグリソームクリアランスこれまでに試験管レベルおよび細胞レベルでユビキリン１がLLPSを誘導することで液滴形成し，その液滴にα-シヌクレイン (aSyn)が取り込まれることを見出してきたが，これがどのような生理的・病理的意味を示すかが不明であった．一般に液滴は，時間依存的に液体としての性質を消失し，ゲル化することが報告されている．そこで試験管レベルでユビキリン1および２，４の液滴の時間変化を測定したところ，ユビキリン１の液滴は72時間以降でゲル化が観察された．一方，ユビキリン１は120時間までゲル化が観察されず，ユビキリン４の液滴はかなり早い段階から液性を消失させてゲル化していることがわかった．さらに電子顕微鏡観察でaSynを取り込んだユビキリン２の液滴はゲル化にともなって，ユビキリン２とaSyn複合体のフィブリル形成が誘導されたことがわかった．テーマ2：Miclxinによるアグリソーム形成機構Miclxinがアグリソーム形成を促進したことから，その標的タンパク質であるMIC60の機能阻害が騰ソーム形成を誘導するか検証した．３種類のMIC60のsiRNAをSH-SY5Y細胞に導入し，MIC60の発現抑制を確認した状態でもアグリソーム形成は誘導されなかった．このことから，Miclxinによるアグリソーム形成促進にはMIC60以外の標的タンパク質が関与することがわかった．そこで，Miclxinの類縁化合物の中から，Miclxin同様，アグリソーム形成を促進活性を有し，さらにMIC60に作用しない化合物を探索した．その結果，JU23と命名した新規化合物に目的の活性を見出した．