リンゴ柱状樹形誘導機構の解明と応用研究

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本研究では、2つのアプローチ①・②を展開している。①：リンゴDOX-Coの本来機能の解明では、操作性・コスト面・ハイスループット効果等の観点を勘案して当初想定していた3法の中からGC-MSを用いるシステムでDOX-Co特異的阻害能を有する化合物選抜試験系を整備し効率化を図った。種々の確認を経てすでに本格的なスクリーニングを開始している。また、リンゴ以外の植物体からDOX-Coと同機能を持つ分子種が存在したならば本アプローチ推進の起爆剤になると考え、候補遺伝子産物を調製して酵素活性の検出を試みた。その結果、類似の酵素活性の検出に奏功した。②：リンゴDOX-Co遺伝子の発現制御機構の解明およびリンゴ由来ジベレリン生合成酵素の性状解析では、カラムナー品種におけるリンゴDOX-Co遺伝子発現に関与し得る転写因子の絞り込みと見極めのため、すでに実施済みであるRNAseqデータを参照して、得られていた既存DNAコンティグ配列を対象とするタンパク質コード領域の探索およびBLASTpによる比較を行った。遺伝子アノテーションを実施することにより、数種の転写因子を含むDEG遺伝子リストを作成した。加えて、転写活性に必要なシス配列としての機能が「レトロポゾンLTR」に存在する可能性を検証することを目的として、ルシフェラーゼをレポーターとするレポーターアッセイ用コンストラクトを完了した。同様に、RNAseqデータの参照から既知ジベレリン生合成酵素に相同性が高い配列情報を選抜した。