免疫組織化学的手法によるオーキシンの動態および局在性に関する研究

利用免疫组织化学技术研究生长素动力学和定位

• 批准号: 05760095
• 负责人: 中嶋 正敏
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760095/
• 关键词: 免疫組織化学; t-Zeatine; IAA; マイクロスライサ-; ニトロセルロース膜; Amoracia rusticana; 毛状根; 蛍光標識抗体

1.研究目的 各種の物理化学的分析により、器官レベルにおける植物ホルモンの量的な解析については数多く報告されているが、組織レベルでの解析例はほとんどない。また、申請者らは植物ホルモンと特異的に結合する数種の抗体の調製を既に完了している。そこで本研究では、初めに植物ホルモンの組織への固定化についてニトロセルロース膜を用いたモデル系で設定を行い、固定効率の最適化を図った後、植物ホルモンの関与が示唆される生理現象に着目し、抗体を用いた免疫学的手法によりそれらの組織内分布の解析を行うことを目的とする。2.研究方法および成果 BSA及びKLHタンパク質を吸着させたニトロセルロース膜上でパラホルムアルデヒド蒸気による固定化,銀増感・金コロイド法を用いた免疫染色により数ナノグラムのIAAが肉眼で検出可能となった.また、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒド蒸気を併用した固定化により同レベルのt-zeatineも検出可能となった.このモデル系を応用し、ワサビ(Amoracia rusticana)毛状根におけるt-zeatineの組織内分布の解析を試みた。毛状根の先端を採取し凍結乾燥後、上述の蒸気固定を行い、寒天に包埋して緩衝溶液中にてマイクロスライサ-で薄切片を調製した.蛍光標識二次抗体を用いて染色後、蛍光顕微鏡で観察した.これより各種対照区では蛍光が観察されず、t-zeatineが局在すると想定される先端部では有意に蛍光が観察された.今回、マイクロスライサ-を導入したことにより、包埋操作に要する時間の簡略化が図れた上,組織内への樹脂の浸透促進剤として使用していた有機溶媒が不要となり、固定された植物ホルモンの、抗体に対する親和性を損なう恐れの少ない薄切片調製が可能になった.これらの基礎技術は多くの免疫組織化学に応用できると考えている.

1. Research purpose Various physical and chemical analysis, organ analysis, and plant analysis.についてはnumerous reportされているが、organizationレベルでのanalytic exampleはほとんどない. The applicant has prepared a specific combination of several types of antibodies from the plant ホルモンと and has completed the preparation.そこでThis research is based on では、Initial めにPlant tissue and immobilization についてニトThe ロセルロース membrane uses a いたモデル system to set the line and optimize the fixed efficiency. After that, the relationship between plant health and physiological phenomena and the use of antibodies The method of immunology is to analyze the distribution in tissues and to analyze the distribution in tissues. 2. Research methods and results BSA and びKLH タンパク性をsorption させたニトロセルロース on the film でパラホルムアルデヒド steamed によImmobilization, silver-sensitized and gold-inducible immunostaining can be performed with the naked eye using the immunostaining techniqueとなった.また、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒド steamed 気を and fixed with したにより Same as レベルのt-zeatineも検出possibleとなった.このモデル System を応用し、ワサビ(Amoracia rusticana)hairy rootにおけるt-zeatineのanalyzing the distribution within the tissueをtrialみた. The apex of the hairy roots was harvested and freeze-dried, then steamed and fixed as described above, then embedded in cold weather and dissolved in a buffer. Preparation of thin slices in liquid liquid. Secondary antibody labeled with light is stained with いてAfter, 荍光鍕Microscopeで観看した.これよりVarious 対光区では蛍光が観看されず、t-ze atine's situation is determined by the idea of ​​the tip of the head, and the intention is the light of the light. This time, マイクロスライサ-をIntroduction したことにより, Embedding operation にRequired するTime simplification が図れたOn the tissue, the penetration of the resin into the tissue is promoted, and the organic solvent is used and the fixation is done.された Plant ホルモンの, Antibody に対するaffinity を Damage なう fear れの小ないThin section preparation がAbility to use basic techniques and techniques such as immunohistochemistry and immunohistochemistry.