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アサガオ未熟種子に存在するジベレリン応答性加水分解酵素の組織化学的解析

未成熟牵牛花种子中赤霉素响应性水解酶的组织化学分析

基本信息

批准号：
12760074
负责人：
中嶋正敏
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

アサガオ未熟種子中で発現するα-アミラーゼ相同遺伝子(PnAmy1および2)をクローニングした。この内、発現量の多いPnAmy1に焦点を絞り以降の解析を行った。大腸菌発現系を用いて調製したPnAmy1-GST融合タンパク質を用いて活性染色を行った結果、アミラーゼ活性を示した。これによりPnAmy1がα-アミラーゼをコードすることを確認した。mRNA発現解析において、ジベレリン(GA)処理後1-6時間の範囲で明瞭なGA応答能を確認した。抗PnAmy1抗体を用いて行ったウェスタン解析では、種子可溶性画分中のPnAmy1存在量および用いた抗体の特異性からPnAmy1の組織化学的解析が可能と判断し、免疫組織化学を行った。対照区との比較からデンプン粒の存在する珠皮中に特異的染色を検出し、GA局在部位と空間的に合致する結果を得るとともに、GAの局在時期から数日遅れて染色強度が極大に達したため、GAがPnAmy1を直接誘導する可能性が示唆された。一方、PnAmy1のin situ hybridizationでは珠皮よりも種皮付近により強いシグナルを認めたことから、免疫組織化学とin situ hybridizationの手法としての違いに起因する差異であるのか、あるいは転写・翻訳時の産物が移動する可能性なども視野に入れ現在も解析を継続している。本研究で得た情報は、穀類など単子葉植物においては古くから知られている「種子発芽時にGAがひきおこすα-アミラーゼ等加水分解酵素群の誘導とそれに続くデンプンの分解現象」が、アサガオではより早期の生殖成長期である種子成熟過程で同様のカスケードとして機能する可能性を提唱するものであり、今後、この系が他の双子葉植物においても該当する一般的な現象であるのか確認したい。

In the unripe seeds, we can see that the samples are the same as those of the uncooked seeds (PnAmy1 seeds 2). In order to resolve the row data, the internal and external quantities are more than the PnAmy1 focus. The main fungus strain was used to fuse PnAmy1-GST. The results were compared with the active staining method, and the activity was shown by the fusion assay. Please check PnAmy1 alpha-please confirm your request. MRNA now understands that the GA response can be confirmed within a range of 1-6 hours after the analysis of the customer and the GA. Anti-PnAmy1 antibody was used to detect the presence of PnAmy1 in the soluble fraction of the semen, the specific antibody was used to detect the specific antibody, the histochemical analysis of PnAmy1 may be used, and the immunohistochemical method could be used. In the contrast area, there was a special stain in the bead skin, the result of the combination of the GA bureau in the space of the location, the strength of the dye strength test in the time period of several days, and the possibility of direct direct guidance of the GA PnAmy1. On the one hand, PnAmy1 in situ hybridization beads are used to make sure that the skin is sensitive, and the immunohistochemical method in situ hybridization is used to determine the cause of the problem, and the possibility that the object will be moved when it is written. In this study, we have obtained the results of the study that the water hydrolyzyme group leads to the decomposition of the enzyme group, such as the water hydrolyzyme group, and so on. In this study, we have obtained the results of this study, such as the introduction of water hydrolyzyme groups, such as the introduction of water hydrolyzyme groups, such as the introduction of water hydrolyzymes, such as the formation of GA seeds in the bud. In the early stage of reproductive development, long-term children mature in the same way as they can raise the possibility that they will be born in Gemini plants. In the future, they will be able to make sure that they are like children in general.