免疫組織化学的手法による種子中ジベレリンについての動態解析

免疫组织化学法动态分析种子中赤霉素

• 批准号: 08760114
• 负责人: 中嶋 正敏
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760114/
• 关键词: ジベレリン; アサガオ; 免疫組織化学; 免疫学的定量法; カルボジイミド

1.目的 高等植物の生長に必須であり種々の生理現象に関与するジベレリンは、一般には未熟種子内に高濃度に存在することが報告されている。特に双子葉植物の場合、これらの役割や生産場所・時期、代謝・移動様式等については不明な点が多く非常に興味深い。そこで、それらの局在性について成熟途上のアサガオ未熟種子を材料に用い活性型ジベレリンに焦点を絞った組織内分布に関する解析を計画した。2.方法および成果 開花後2週間前後の未熟種子を採取し、直ちに連続48時間の凍結乾燥処理を行い、カルボジイミド系ガスによる固定化反応を施した。包埋用樹脂にはパラフィンを用い硬度の設定等を行った後に薄切片を調製した。活性型ジベレリンに対する特異抗体を用いた免疫学的定量分析法により種子内における内生量について算定を行い、存在量が検出感度を上回るレベルであることを確認した。その上でパラフィン切片を調製しペルオキシダーゼ標識による免疫組織化学を行った。形態的な特徴として用いた未熟種子では幼根が認められるものの子葉部はあまり発達しておらず、胚乳様物質の存在が若干認められた。その状況の中で免疫組織化学の結果、子葉の一部にジベレリン特異的と考えられる染色部位が観察された。すなわち、正常血清や活性型ジベレリンを予め反応させた特異抗体等を用いた対照区ではそのような有意な染色は認められなかった。これらの局在部位については現在くわしく検討中である。定量分析の結果より種子中において、用いた抗体に反応するものの大部分がGA1またはGA3であり、抗体に反応性を有する配糖体等はほとんど検出されなかったことから、アサガオ種子は純粋に活性型ジベレルンに限定した動態解析を行う場合の好適材料であり、本研究によりその基盤技術を構築することができたと考えている。

1. Purpose The physiological phenomena related to the growth of higher plants and the presence of high concentrations of chlorophyll in immature seeds are generally reported. The specific situation of dicotyledonous plants, the production site, period, metabolism, and movement patterns of dicots are not clear and the points are many. It is very interesting and interesting.そこで、それらのbureau is on the way to sexual maturity and のアサガオ unripe seeds are used for materialsいActive type ジベレリンにfocus を twist ったdistribution within the tissue に关するanalytic をplan した. 2. Method: Harvest the immature seeds 2 weeks after flowering, freeze-dry them for 48 hours, and freeze-dry them for 48 hours. The resin used for embedding can be prepared by setting the hardness and setting the thickness of the embedding resin before thin sectioning and preparation. Active type ジベレリンに対するspecific antibodyをQuantitative analysis method of いたimmunologyによりにおけるThe endogenous quantity is calculated and determined, and the existing quantity is determined and determined. The last chapter is confirmed by the last chapter. The その上でパラフィン slice を modulation しペルオキシダーゼlabel によるimmunohistochemistry を行った. The shape of the special な特徴として uses the いた unripe seeds では the young roots がcognize められるものの子The leaf parts are clear and the endosperm substances are present. The results of immunohistochemistry in the condition of the cotyledon and the specific staining site of the cotyledon were examined.すなわち, normal serum やactive type ジベレリンをyuめanti-濜させた specific antibody Waiting for the color of the area to be dyed and the color to be dyed is the color of the area. It's a good place to be in the middle of the game now. The results of the quantitative analysis showed that most of the seeds in the seeds were において, and the いたantibody was used to detect the majority of the するもののGA1またはGA3 であり, antibody にreactive を有するglycoside, etc. はほとんど検出されなかったことから, アサガオseedはpure粋にactive typeジベレルンにlimitedしたdynamic analysisを行うoccasionのIt is a good material, and this research is based on the basic technology of the company.