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雄因子と共に配偶子膜融合を担う雌因子の同定と解析：重複受精分子メカニズムの解明

负责配子膜融合的雌性因素与雄性因素的鉴定和分析：阐明双受精的分子机制

基本信息

批准号：
21H02517
负责人：
井川智子
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

R4年度では，配偶子膜融合因子であるGCS1と相互作用するタンパク質種のプロテオーム解析結果より，検出信頼度が高いタンパク質種の中から「雌性組織での発現が期待されるもの」，「推定膜貫通領域を有するもの（あるいは膜局在シグナル配列を有するもの）」を主な指標として，その後の生化学及び分子生物学的解析の対象となるタンパク質種を数種選抜した。これらのタンパク質種とGCS1との相互作用を再検証するために，生化学的評価を行った。生化学的評価ではin vitroタンパク質合成とpull-downアッセイを行った。その結果，3種のタンパク質種においてGCS1との相互作用が示唆された。また別に，ベンサミアナタバコでのタンパク質発現による相互作用評価を行うため，遺伝子導入用のベクターを構築して，解析のツールを整備したた。解析対象タンパク質種に関して局在解析を行うため，内在性プロモーターからCDSを含む領域をクローニングして，C末端側にGFP遺伝子を融合させた遺伝子発現コンストラクトを作製した。これらコンストラクトを導入したシロイヌナズナ遺伝子組換え体を得た。上記タンパク質種において，タンパク質種Aについては，雌性配偶子の原形質膜上の局在が確認された。機能解析を行うべく，ゲノム編集によって遺伝子Aの変異個体を作出した。しかし遺伝子変異と表現型の相関が安定せず，再検証の準備を進めた。また別のタンパク質種Bについては，CRISPR/Cas9によるゲノム編集を行い，遺伝子組換え体第1世代の種子が獲得できた。

R4 annual では, gamete membrane fusion factor であるGCS1 とinteraction するタンパク plasm species のプロテオームThe analysis results are as follows: ”, “It is presumed that the membrane penetration area is there (the membrane bureau is in the sewage arrangement area)” を主な means Marked by として, その后のanalytical chemistry and びmolecular biology の対 resemble となるタンパク plasmons をseveral selections 抜した.これらのタンパク plasm とGCS1 and とのinteraction をre-proven するために, biochemical evaluation 価を行った. Biochemical evaluation of biochemical synthesis and pull-down in vitro materials. As a result, three kinds of のタンパク plasmons, においてGCS1, and との interact with each other.また比に,ベンサミアナタバコでのタンパク性発成によるinteraction review価を行うため, the のベクターをconstructed して with the remaining 伝子 introduction, and the のツールをmaintenance したた was analyzed. Analysis of the image of the object is done in the field of analysis, and the internal nature of the CDS is included in the field. The クローニングして, the C-terminal side of the GFP left 伝子を fusion させた漝子発発 appear コンストラクトをした. The これらコンストラクトを imports the したシロイヌナズナ伝sub组changeえ体を得た. The above notes are the タンパク plasmon species において, the タンパク plasmon species A については, and the female game partner's prototype on the plasma membrane is confirmed された. Functional analysis is done, and ゲノムedited by によって缝子Aの変different individual is made. The difference in the phenotype and the correlation between the phenotypes have been stabilized, and the preparations for further testing have been carried out.またbieのタンパク plasm seed Bについては, CRISPR/Cas9 によるゲノムassembled を行い, and the remaining seeds of the first generation of the body were obtained by できた.