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細胞間結合タイトジャンクションの形態形成メカニズムの解明

阐明细胞间紧密连接的形态发生机制

基本信息

批准号：
21H02523
负责人：
古瀬幹夫
金额：
$ 11.15万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

タイトジャンクション（ＴＪ）をもたないクローディン欠失ＭＤＣＫ細胞に、クローディンの各サブタイプを発現させてＴＪを再構成させ、その形態、バリア機能を解析した。クローディン欠失ＭＤＣＫ細胞を樹立する際にゲノム編集により破壊した5つのクローディンは、そのすべてが単独でバリアとして機能的なTJを形成できる一方、ＭＤＣＫ細胞に内在性に発現するクローディン１２、１６はＴＪを形成できないことが明らかになった。凍結割断法による解析からTJを再構成した5つのクローディンのうち、クローディン１，２，３は分岐のあるＴＪストランドを形成し、クローディン4は平行で交わりにくいＴＪストランドを形成した。次に、チャネル型クローディンであるクローディン２、１０ａ, １０ｂ, １５をそれぞれ単独でクローディン欠失ＭＤＣＫ細胞に発現させたところ、いずれのクローディンも単独でTJを形成し、paracellular flux アッセイにおいて十分なバリア機能を示す一方、従来報告されていた陽イオン選択性（クローディン２, １０ｂ, １５）、陰イオン選択性（クローディン１０ａ)を示した。したがって、これらのチャネル型クローディンは、他のクローディンサブタイプと相互作用することなく単独でチャネルを形成していることが証明された。今後、異なる発現量、あるいは特定のクローディンのサブタイプの組み合わせにより再構成されたTJの形態と機能の解析にこの研究を発展させる。

The TJ is a new type of cell, and the TJ is a new type of cell, and the TJ is a new type of cell. When MDCK cells are established, they must be compiled and stored. When MDCK cells are established, they must be stored. When MDCK cells are stored, MDCK cells must be stored. Freeze-cut method is used to analyze TJ and reconstitute TJ and TJ. TJ and TJ are divided into two parts: TJ and TJ. TJ and TJ are divided into two parts: TJ and TJ. 2, 10a, 10b, 15 are the only ones that are missing MDCK cells. The only ones that are missing MDCK cells are the ones that are missing MDCK cells. The only ones that are missing MDCK cells are the ones that are missing MDCK cells. The only ones that are missing MDCK cells are the ones that are missing MDCK cells.(2, 10b, 15), negative selection (10a). This is a demonstration of the interaction between the two groups. In the future, the research on the morphology and function of TJ will be developed.