Establishment of a novel therapeutic strategy against influenza virus infection based on the regulation of cellular lipid metabolism.

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１）DPPSの産生が抗ウイルス性amphisomeの形成に必須であることの証明１－１）ABCA3高発現MDCK細胞ならびにPVF-tet処理した細胞を用い、IAV感染に対して産生誘導されるamphisomeを高純度に単離する系の確立を試みた。単離にあたっては、蛍光標識HAを発現するMDCK細胞を用い、PVF-tet処理後IAV感染させ、細胞をシリンジを用いてマイルドに破砕後、遠心処理によりamphisomeの粗画分を得た。この画分を抗LC3抗体で蛍光標識した。得られたamphisome画分をHAの蛍光並びにLC3の蛍光を指標に、FACSを用いてダブルポジティブ画分を分離後最終amphisomeとした。しかしながら、本法では蛍光を持たない脂質画分の持ち込みが多いことから、今後さらに純度を高める必要があることが示された。一方で、両細胞由来total lysateを用いて脂質抽出後、MS-MS分析装置を用いて各種脂質分子種分析を行った。その結果、感染に伴ってDPPS、DPPCの増加が再現性良く検出できる系を新たに確立した。１－２）siRNAを用いたPS合成酵素（PSS1）のノックダウン、PSS1の高発現細胞の樹立（MDCK細胞あるいはヒト肺胞上皮細胞株A549を使用）を試みた。これまでに、PSS1のノックダウンの系を確立し、IAV感染に伴うamphisome形成ならびに細胞障害活性・ウイルス産生量に対する効果を検討した。その結果、PSS1のノックダウンによりamphisome の形成並びにPVF-tetの抗ウイルス活性が減弱すること、を見出した。