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Establishment of a novel therapeutic strategy against influenza virus infection based on the regulation of cellular lipid metabolism.

建立基于细胞脂质代谢调节的流感病毒感染新治疗策略。

基本信息

批准号：
21H02629
负责人：
西川喜代孝
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Doshisha University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

１）DPPSの産生が抗ウイルス性amphisomeの形成に必須であることの証明１－１）ABCA3高発現MDCK細胞ならびにPVF-tet処理した細胞を用い、IAV感染に対して産生誘導されるamphisomeを高純度に単離する系の確立を試みた。単離にあたっては、蛍光標識HAを発現するMDCK細胞を用い、PVF-tet処理後IAV感染させ、細胞をシリンジを用いてマイルドに破砕後、遠心処理によりamphisomeの粗画分を得た。この画分を抗LC3抗体で蛍光標識した。得られたamphisome画分をHAの蛍光並びにLC3の蛍光を指標に、FACSを用いてダブルポジティブ画分を分離後最終amphisomeとした。しかしながら、本法では蛍光を持たない脂質画分の持ち込みが多いことから、今後さらに純度を高める必要があることが示された。一方で、両細胞由来total lysateを用いて脂質抽出後、MS-MS分析装置を用いて各種脂質分子種分析を行った。その結果、感染に伴ってDPPS、DPPCの増加が再現性良く検出できる系を新たに確立した。１－２）siRNAを用いたPS合成酵素（PSS1）のノックダウン、PSS1の高発現細胞の樹立（MDCK細胞あるいはヒト肺胞上皮細胞株A549を使用）を試みた。これまでに、PSS1のノックダウンの系を確立し、IAV感染に伴うamphisome形成ならびに細胞障害活性・ウイルス産生量に対する効果を検討した。その結果、PSS1のノックダウンによりamphisome の形成並びにPVF-tetの抗ウイルス活性が減弱すること、を見出した。

1) Proof of DPPS production in order to resist the formation of amphisome 1-1) Establishment of ABCA3 high expression MDCK cells and PVF-tet treated cells in order to induce the production of amphisome in high purity In addition, after treatment with PVF-tet, IAV infection, cell separation, and remote treatment, rough analysis of amphisome was obtained. The anti-LC3 antibody was identified by fluorescence. The amphisome is separated from the HA and the LC3. This method is used to determine the purity of lipids. After extraction of lipid, MS-MS analysis device was used to analyze various lipid molecular species. The results, infections, and increases in DPPS and DPPC are reproducible, and new systems are established. 1-2 The use of siRNA in PS synthase (PSS1) and the establishment of high expression cells of PSS1 (MDCK cells and lung epithelial cell line A549) This study was conducted to investigate the effects of PSS1 infection on the establishment of the system, the formation of amphisome, and the production of cell damage activity. As a result, the formation of amphisome and the decrease of anti-amphisome activity of PVF-tet in PSS1 were observed.