細胞内新生Sタンパクを標的とした新規COVID-19治療薬の開発

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１）SタンパクのRBD(S1-RBD)を標的としたペプチド性阻害薬の同定（西川・和久）；バキュロウイルス発現系を用いてS1-RBDのC末端にHis-tagを導入したS1-RBD-(H6)、ならびにACE2との結合に重要な役割を果たしているアミノ酸（K417）に個別に変異を導入した一連の変異体を作成し、多価型ランダムペプチドライブラリー法による高親和性モチーフの取得を行った。なお、S1-RBDならびにK417A-S1-RBDとACE2との結合活性はELISA法を用いて検討済みであり、S1-RBDに比べK417A-S1-RBDでは結合活性が顕著に減弱していることを確認している。多価型ランダムペプチドライブラリー（ランダムアミノ酸を含むペプチドを4本有する４価型ペプチドライブラリー）をセルロースシート上に合成したものを作成した。１次ライブラリーでは7アミノ酸からなるライブラリー部全てについてランダムアミノ酸を導入している。本シートを、野生型S1-RBDとK417A-S1-RBDでブロットし、抗His-tag抗体を用いて各スポットへの結合量を評価した。スクリーンングにあたっては、K417A-S1-RBDよりも野生型S1-RBDにより強く結合することを指標にした。１次スクリーニングで決定した最適アミノ酸とその部位に関する情報をもとに、２次ライブラリーを作成し、同様の検討を行った。これまでに、4次スクリーニングまで進行しており、候補となる5次スクリーニング用のライブラリーを３系統樹立した。