表皮細胞に存在するCa^<2+>依存性および非依存性Cキナーゼ基質蛋白に関する解析

表皮细胞中存在的Ca^2+依赖性和非依赖性C激酶底物蛋白的分析

• 批准号: 05770068
• 负责人: 西川 喜代孝
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770068/
• 关键词: Cキナーゼ; 表皮細胞; transforming growth factor-beta; アイソザイム; 内在性基質蛋白; 細胞内情報伝達

我々は既にマウス培養表皮細胞を用い、phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)により10個の内在性蛋白のリン酸化レベルが変化すること、またこれらのうち3つの蛋白、KP-1(pI4.7/23,000Mr)、KP-2(pI4.7/20,700Mr)、KP-10(pI4.7/25,500Mr)のリン酸化レベルはPMA刺激により著しく亢進することを見いだしている。さらに無傷細胞において、KP-1及びKP-2はCa^<2+>依存性Cキナーゼ(cPKC)の活性化を介して、またKP-10はCa^<2+>非依存性Cキナーゼ(nPKC)の活性化を介しそれぞれリン酸化されることを明らかにしている(K.Nishikawa et al.,Cell.Signal.,4,1992,757-776)。本研究ではこれらの基質蛋白をプローブとし、表皮細胞に対して強力な増殖抑制作用を有するtransforming growth factor-beta(TGF-beta)の細胞内情報伝達機構におけるcPKC及びnPKCの関与を検討した。その結果、TGF-beta(3ng/ml)はPMAにより亢進されるKP-1,KP-2,KP-10のリン酸化反応を強力に抑制することが明らかとなった。一方、TGF-betaはあらかじめPMAによりリン酸化されたこれら3つの蛋白の脱リン酸化反応は促進しなかった。このことはTGF-betaによるリン酸化反応の抑制は脱リン酸化反応の促進によるものではないことを示している。表皮細胞をTGF-beta(3ng/ml)で1時間処理すると、可溶性画分及び膜画分のcPKC活性(Ca^<2+>-dependent KP-1 and KP-2 phosphorylating activity)は強く抑制されたが、nPKC活性(Ca^<2+>-independent KP-10 phosphorylating activity)は変化しなかった。このことは、TGF-betaはcPKC活性を抑制することによりcPKCを介する細胞内蛋白リン酸化反応を抑制するがnPKCを介する細胞内蛋白リン酸化反応についてはそれとは異なった機構により抑制していることを示している。以上の結果からTGF-betaの細胞内情報伝達機構にはcPKC及びnPKCが関与していること、さらに両者の関与機構は異なることが明らかとなった。

We cultured epidermis cell lysate, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) protein, acidified protein, protein 3 protein, KP-1 (pI4.7/23000Mr), KP-2 (pI4.7/20700Mr), KP-10 (pI4.7/25500Mr), acidification, PMA stimulation, hyperactivity, hyperactivity. This is not true for KP- 2, KP-1, and lt;2+> dependencies. C) dependence (cPKC) on activation, KP- 10, Ca ^ & lt;2+> non-dependencies. (nPKC) Activation, acidification, acidification, and activation. In this study, transforming growth factor-beta (TGF-beta) cytoskeleton cPKC and nPKC DNA were used to detect the strong colonization inhibition of human epidermis cells. The results showed that TGF-beta (3ng/ml) PMA could increase the activity of KP-1,KP-2,KP-10, acid, acid and acid. On the one hand, TGF-beta made use of acidifying agents, such as PMA chips, acidizing agents, acidizing agents, acidifying agents, acidizing agents, acidizing agents, acidifying agents, acidizing agents, acidifying agents, acidifying agents, acidizing agents, acidifying agents, acidizing agents, acidizing agents, acidifying agents, aci After TGF-beta treatment, acidizing reaction inhibition, acidizing reaction inhibition, acidizing reverse acidizing reaction, promotion of acidizing reaction, acidizing reaction, acidizing, acidizing, acidizing The activity of TGF-beta (3ng/ml) in epidermis, the activity of soluble cPKC and the activity of cPKC in membrane painting (Ca ^ & lt;2+>-dependent KP-1 and KP-2 phosphorylating activity) strongly inhibited the activity of nPKC (Ca ^ & lt;2+>-independent KP-10 phosphorylating activity). The activity of TGF-beta cPKC inhibits the activity of intracellular proteins in the cells induced by cPKC and inhibits the acidification of intracellular proteins. NPKC mediates the acidification of intracellular proteins. As a result of the above results, the TGF-beta information mechanism is responsible for the registration of cPKC and nPKC information and the registration of the recipient and the organization.