複数因子の同時阻害による新規治療標的探索法の開発

本研究では、クロマチン制御因子のパラログ因子群の同時抑制による治療標的探索法を確立し、クロマチン制御因子欠損がんに選択的に致死性を示す治療標的を同定することを目的としている。2021年度は、クロマチン制御遺伝子のパラログペアを同時に抑制するsiRNAライブラリーを構築し、いくつかの合成致死標的となるパラログペの候補を抽出した。2022年度は、それらの中でSMARCB1欠損型細胞株モデルでの検討を行った。SMARCB1欠損型細胞株（ーSMARCB1細胞株）において、SMARCB1のcDNAを導入したレスキュー細胞株（+SMARCB1細胞株）を構築した。すなわち、これらの細胞株は、同じ細胞株バックグラウンドにおいて、SMARCB1があるか（+SMARCB1細胞株）、ないか（ーSMARCB1細胞株）の違いのみであるアイソジェニック細胞株モデルである。このSAMRCB1のアイソジェニック細胞株モデルを用いて、パラログペアsiRNAライブラリーによって、パラログペアを同時抑制したときに＋SMARCB1細胞株では生存し、－SMARCB1細胞株では致死性を示す、すなわち合成致死性を示すパラログペアを探索した。その結果、7ペアのパラログペアを抽出した。その中で1ペアは既存の標的候補であったため、スクリーニング自体の信頼性も担保されていると考えられた。そこで、残りの6ペアについて、別のバックグラウンドのSMARCB1正常型細胞株とSMARCB1欠損型細胞株で再検証を行った結果、1ペアのパラログペアX1/X2を絞り込んだ。さらにX1/X2の合成致死標的パラログペアの有望性を検証するために、SMARCB1正常型6細胞株とSMARCB1欠損型細胞株6細胞株の細胞株モデルで再検証した結果、SMARCB1欠損型細胞株群で選択的に致死性、すなわち合成致死性を示すことを明らかにした。

本研究では、クロマチン制御因子のパラログ因子群の同時抑制による治療標的探索法を確立し、クロマチン制御因子欠損がんに選択的に致死性を示す治療標的を同定することを目的としている。2021年度は、クロマチン制御遺伝子のパラログペアを同時に抑制するsiRNAライブラリーを構築し、いくつかの合成致死標的となるパラログペの候補を抽出した。2022年度は、それらの中でSMARCB1欠損型細胞株モデルでの検討を行った。SMARCB1欠損型細胞株（ーSMARCB1細胞株）において、SMARCB1のcDNAを導入したレスキュー細胞株（+SMARCB1細胞株）を構築した。すなわち、これらの細胞株は、同じ細胞株バックグラウンドにおいて、SMARCB1があるか（+SMARCB1細胞株）、ないか（ーSMARCB1細胞株）の違いのみであるアイソジェニック細胞株モデルである。このSAMRCB1のアイソジェニック細胞株モデルを用いて、パラログペアsiRNAライブラリーによって、パラログペアを同時抑制したときに＋SMARCB1細胞株では生存し、－SMARCB1細胞株では致死性を示す、すなわち合成致死性を示すパラログペアを探索した。その結果、7ペアのパラログペアを抽出した。その中で1ペアは既存の標的候補であったため、スクリーニング自体の信頼性も担保されていると考えられた。そこで、残りの6ペアについて、別のバックグラウンドのSMARCB1正常型細胞株とSMARCB1欠損型細胞株で再検証を行った結果、1ペアのパラログペアX1/X2を絞り込んだ。さらにX1/X2の合成致死標的パラログペアの有望性を検証するために、SMARCB1正常型6細胞株とSMARCB1欠損型細胞株6細胞株の細胞株モデルで再検証した結果、SMARCB1欠損型細胞株群で選択的に致死性、すなわち合成致死性を示すことを明らかにした。