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単球・マクロファージおよびミクログリアの動態からみた中枢神経障害の病態解析

从单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞动力学角度分析中枢神经系统疾病

基本信息

批准号：
21H03032
负责人：
田崎修
金额：
$ 9.98万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03032/
关键词：
ミクログリア中枢神経障害

项目摘要

救急・集中治療領域では、頭部外傷後の後遺症や、敗血症・熱中症後の認知機能障害やうつ症状が社会復帰への大きな障壁となっている。しかし、そのメカニズムは未だに解明されていない。単球・マクロファージ(Mo/Ma)やミクログリア(Mi)のフェノタイプは共通して炎症性、あるいは抗炎症性に作用すると考えられたきたが、我々はMo/MaやMiが異なる時期に異なる作用を与えるのではないかと考えた。本研究では、頭部外傷、敗血症、熱中症モデルを用いて、それぞれが急性期の炎症や亜急性期の神経再生に果たす役割を明らかにすることを目的とした。今年度はマウス頭部外傷(TBI)モデルでsham, TBIday1, およびTBIday7の3群の脳挫傷部よりRNAを抽出し次世代シークエンサー(NGS)によるトランスクリプトーム解析をすすめて、統計的に有意な発現変化を示したターゲットを同定した。NGSでは1300のmRNAの発現に有意差を認め（p<0.05）、shamに対して2倍以上の変動を示したなかから、GO解析、Pathway解析でマクロファージとミクログリアに関与する遺伝子群を抽出してqPCRを施行した（各群n=6）。遺伝子群から抽出したマーカーのqPCRでは、Day1でccr2, ccl3, cxcr2, trem1, cd14の増加（p<0.05）とaif, tmem119, rgmaの低下（p<0.05）をみとめ、Day7でcsf1, cst7の有意な上昇を示した（p<0.05）。mRNAの発現パターンからTBI後Day1ではマクロファージが有意な活性化を示し、Day7で神経阻害因子RGMaを発現したミクログリアが増加して神経再生阻害にはたらくことが示唆された。また並行して脳組織の凍結切片の作成と免疫染色、脳組織から細胞を分離してフローサイトメーターによる測定の基礎的な手技の確立を進めた。

Emergency·Intensive treatment areas, sequelae after head injury, blood poisoning, cognitive impairment after fever, symptoms, social relapse, and major barriers It's not easy to find a solution to this problem. In addition, the study of the effects of anti-inflammatory and inflammatory drugs on the immune system in the early stages of the disease has also been carried out. The purpose of this study is to investigate the effects of acute inflammation, acute nervous regeneration, and acute head injury, sepsis, and fever. This year, three groups of ecchymosis RNA were extracted from head injury (TBI), sham, TBIday 1, and TBIday7, and the next generation of head injury (NGS) was analyzed and statistically analyzed. NGS mRNA expression was significantly different (p<0.05), sham mRNA expression was more than 2 times higher, GO analysis, pathway analysis, and qPCR was performed (n=6 for each group). The qPCR of Day1, ccr2, ccl3, cxcr2, trem1, cd14 increased (p<0.05), aif, tmem119, rgma decreased (p <0.05), Day7, csf1, cst7 increased intentionally (p<0.05). The expression of mRNA increased on Day1 after TBI and increased on Day7 after TBI. To establish the basic techniques for the preparation of frozen sections of tissue and for the isolation of cells from tissues