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血液脳関門の細胞間隙透過性亢進時における脳内微小環境のイメージング

血脑屏障细胞间通透性增加期间大脑微环境的成像

基本信息

批准号：
19K16350
负责人：
橋本洋佑
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16350/
关键词：
Claudin-5 Blood-brain barrier Tight junction 血液脳関門

项目摘要

本研究は、血液脳関門の透過性が亢進した際に生じる脳内の本質的理解を目的としている。その手段として、密着結合の構成本体であるclaudin-5に対するshRNA発現アデノ随伴ウイルスを脳内各所に投与した後の投与部位周辺の脳内細胞の遺伝子発現の変動を、ダイセクターを用いてヒートマップ形式で評価していくことを企画していた。現在は、欧州の大学に留学している関係もあり、動物実験の実施許可を申し込み、必要なトレーニングを受けているが、修了するまで1年近い期間を要する。その間、in vivoでの実験の際にPCRを実施する遺伝子群の絞り込みをすることを目的に、in vitroの実験系によりclaudin-5の発現量を制御する遺伝子を網羅的に検出することを企画している。具体的には、Cas9/CRISPRシステムを用いてclaudin-5を発現している細胞の遺伝子をランダムに欠損させ、claudin-5の細胞表面量に基づいて細胞をフローサイトメトリーにより分離し、分離した細胞で発現しているguide RNAの配列情報からclaudin-5の発現量を正/負に制御している遺伝子群を同定していく。本系により実際に同定した遺伝子をノックダウンすることで、間接的にclaudin-5の発現を制御させることもできると期待される。本年度では、Sigma-Aldrich製のレンチウイルスによるgenome-wide screening kitの購入、同ウイルスを導入するためのブラストサイジン耐性を有するCas9/CRISPRを発現するマウス不死化血管内皮細胞株の作製、claudin-5の細胞外領域を認識する結合する分子の作製を行った。

The purpose of this study is to understand the nature of the hyperpermeability of blood through the blood barrier and its internal properties.そのmeans and として, closely bonded のbody であるclaudin-5 に対するshRNA発appears アデノ accompanying each ウイルスを脳内にinvestment and したAfterwards, the cells in the surrounding area of the injection site will be affected by the changes in the remaining cells.ーを Use the form of いてヒートマップ to evaluate the していくことをplanning していた. Now I am studying abroad at European Universityみ、Necessary なトレーニングをReceived けているが, repaired するまで1 year nearly い period を要する.その间、in vivoでの実験の记にPCRを実士する伝子群のtwisting り込みをすることをpurposeに、in vitroの実験式によりclaudin-5の発 actual amount をcontrol する伝子を内的に検出することを Planning している. Specifically, the Cas9/CRISPR system uses claudin-5 and the cells are damaged. claudin-5 の cell surface amount に base づいてをフローサイトメトリーにより isolation し, isolation した cells で発 appear している guide RNA's arrangement information is the same as claudin-5's positive/negative control. This department is a により実记に同定した伝子をノックダウンすることで, indirectにclaudin-5の発 appear をcontrol させることもできるとLook forward to される. Genome-wide screening of this year's Genome-wide screening by Sigma-Aldrich Purchase the kit, import it with the same kit, and import the same Cas9/CRISPR. Production of immortalized vascular endothelial cell lines and production of claudin-5 extracellular domain recognition and binding molecules.