アミノ酸トランスポーターSLC15A3による新規がん進展機構の解明

氨基酸转运蛋白 SLC15A3 阐明新型癌症进展机制

基本信息

批准号：
19K19254
负责人：
矢原寛子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Center for Global Health and Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K19254/
关键词：
腫瘍血管新生アミノ酸トランスポーター SLC15A3 線維芽細胞転移

项目摘要

腫瘍内血管新生の新たな制御機構の解明は、新規治療標的分子の同定に繋がり得る重要な課題である。本研究では、SLC15A3欠損マウスでルイス肺がん由来細胞（3LL）による腫瘍形成が亢進し、腫瘍塊では血管新生が亢進したことから、アミノ酸トランスポーターという、従来の着眼点とは異なる新規性の高い分子を手がかりとした新たな血管新生制御機構の解明を目指した。初めに、血管新生の可視化法および定量系の確立を試みた。Luciferase発現3LLを用いて、発光イメージングが可能なIVIS　Lumina IIにより、移植した3LLの増殖と転移を経時的に観察する系の構築を行った。しかしながら、細胞の安定性が不十分で、感度は予想より低いものであった。また、マウスの腫瘍塊中の血管走行を比較定量するため、組織透明化三次元イメージング技術CUBICによる透明化とLightsheet Z.1顕微鏡による可視化を試みたが、蛍光標識抗体の静脈投与では可視化が困難であることが明らかとなった。これについて、VE-cadherin-GFPマウスを用いることとした。一方、がんの増殖・転移の亢進に中心的な役割を果たす「責任細胞」の探索では、当初、骨髄（造血系）細胞の一種であるという仮説を有していたが、キメラマウスの実験から、腫瘍内線維芽細胞である可能性が示唆され、ターゲットを変更し研究を進めた。3LLを野生型とSLC15A3欠損マウスに移植し、形成される腫瘍から目的とする線維芽細胞を分離する方法と、単離した線維芽細胞における遺伝子発現の検討を行った。研究室異動により本研究の継続が困難となったため、本年度で廃止となった。

阐明肿瘤内血管生成的新调节机制是一个重要的问题，可以导致鉴定新的治疗靶标分子。在这项研究中，在SLC15A3缺陷型小鼠中，刘易斯肺癌衍生细胞的肿瘤形成（3LL）增加，肿瘤肿块中的新血管形成增加，因此我们旨在阐明使用氨基酸转移蛋白的血管生成机理的新机制，一种与常规焦点相差的高度新颖的分子。首先，我们试图建立一种可视化方法和用于血管生成的定量系统。使用表达荧光素酶的3LL，我们构建了一个系统，该系统使用IVIS Lumina II观察到植入的3LL的生长和转移，该系统允许发光成像。但是，细胞稳定性不足，灵敏度低于预期。此外，为了比较和量化小鼠肿瘤质量的血管运动，我们试图通过使用立方体和使用灯表Z.1显微镜来使组织更清晰，但揭示了可视化对荧光静脉内静脉内施用的抗体抗体抗体的抗体。为此，使用了VE-Cadherin-GFP小鼠。另一方面，在寻找“负责任的细胞”（在增加癌症增殖和转移中起着核心作用）时，我们最初假设它们是骨髓（造血）细胞的一种类型，但对嵌合小鼠的实验表明，它们可能是内毒性成纤维细胞的，因此我们可能会改变目标，并继续进行研究。将3LL植入野生型和SLC15A3缺乏小鼠中，该方法用于将靶标成纤维细胞与形成的肿瘤分开，并研究分离的成纤维细胞中的基因表达。由于实验室的变化，很难继续这项研究，今年被废除了。