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Studies on anti-tumor potential of symbiotic retroviruses and their therapeutic applications

共生逆转录病毒的抗肿瘤潜力及其治疗应用研究

基本信息

批准号：
20H03150
负责人：
宮沢孝幸
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

多くのレトロウイルスは宿主にさまざまな重篤な疾病を引き起こし、獣医臨床上大きな問題となっている。ところがレトロウイルスの一種であるフォーミーウイルスは、宿主に終生持続感染するものの、いかなる疾病も引き起こさない。最近我々は、ニホンザル由来のフォーミーウイルス（SFVmfu）が、がんを抑制するマイクロRNA（miRNA)を大量に産生することを見いだした。本研究は、フォーミーウイルス由来miRNAの抗腫瘍歩転写に着目し、このウイルスがいかにして宿主にがんを引き起こすことなく宿主と共存しているのかを明らかにする。また、フォーミーウイルスが宿主のmiRNA産生系を乗っ取り、大量のmiRNAを産生するメカニズムを明らかにする。そして、これらの知見を利用して、腫瘍抑制性miRNAを強力に発現しうる新規ウイルスベクターを開発し、家畜や伴侶動物を対象とした新規がん治療法へ道を拓く。今回、SFVmfuをモデルとしてmiRNA低発現ウイルスを作製し、ウイルス複製におけるウイルス由来miRNAの影響を調べた。まず、SFVのmiRNAの転写に必要な、長い末端反復（LTR）内のA/B boxおよびTerminator配列に変異を導入したプラスミドを作製した。ルシフェラーゼを用いたmiRNAアッセイの結果、Terminator配列への変異によるLTRプロモーター活性の低下およびmiRNAの発現量の低下が認められた。次いで、Terminator配列への変異を導入した感染性分子クローンを作出し、そのクローンから回収した野生型および変異体ウイルスを感受性細胞に接種した。接種後10日において野生型ウイルスでは明瞭な合胞体形成を主徴とする細胞変性効果（CPE）がみられたものの、変異体ウイルスではCPEは軽微であった。Terminator配列への変異はウイルスの効率的な複製に大きな影響をもたらすことが判明した。

The disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease caused by the disease is caused by the disease caused by the disease.ところがレトロウイルスの一kind of であるフォーミーウイルスは、dormitory The main thing is to keep the infection for life and the disease to cause the disease. Recently I'm 々は、ニホンザル来のフォーミーウイルス（SFVmfu）が、んIt inhibits the production of large amounts of microRNA (miRNA), and it can inhibit the production of microRNA. The origin of this study is the purpose of this study.がいかにしてhostにがんをinducingき出こすことなくhostとcoexistenceしているのかを明らかにする.また, フォーミーウイルスがhost のmiRNA production system を multiply っtake り, a large number of のmiRNA をproduce するメカニズムを明らかにする.そして、これらの知をutilizationして、Tumor-inhibiting miRNA をPowerful に発appears しうる新regulationウイルスベクターを开発し, Domestic Animals やCompanion Animals を対Elephant としたNew Regulations がん Treatment Method へ道を图く. This time, SFVmfuをモデルとしてmiRNA low 発appears ウイルスをproductionし, ウイルス replicates におけるウイルスoriginmiRNA の Impact を Adjustment べた.まず、SFVのmiRNAの転写に必な、long terminal repeat (LTR) inside the A/B box およびTerminator arrangement に変different を import したプラスミドをproduced した.ルシフェラーを Used いたmiRNAアッセイの results, Terminator arrangement への変Idiosynthetic LTR is low in activity and low in activity of miRNA. The second time, the Terminator arrangement, the introduction of the infectious molecules, and the creation of the same , そのクローンから recovery した wild type および変 allogeneic ウイルスを sensitive cells に inoculation した. 10 days after inoculation, syncytial formation was confirmed in the wild-type sterile cells. Sexual effect (CPE) がみられたものの, 変variant ウイルスではCPE は軽微であった. The Terminator arrangement has a different efficiency and a large copy effect, which is clearly understood.