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ファージディスプレイ法を用いたネコ免疫不全ウイルスのレセプター群の解析

噬菌体展示法分析猫免疫缺陷病毒受体群

基本信息

批准号：
13760220
负责人：
宮沢孝幸
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ネコ免疫不全ウイルス(FIV)は、ネコに免疫不全を誘導し、獣医臨床上の大きな問題となっている。FIVとネコの系はヒトのエイズの動物モデルとしても重要である。本研究は、抗体ファージディスプレイ法を応用した新しいアプローチで、FIVのレセプター(群)を同定・解析することを目的とする。本年度の研究成果は以下の通りである。FIVのレセプターを発現するMYA-1細胞からmRNAを抽出後、cDNAを合成し、それをレトロウイルスベクター(pMX)に導入した。このpMXに導入したcDNAライブラリーを、Ecotropic-MuLVのパッケージング細胞であるPlat-E細胞にFuGene6でトランスフェクトすることにより、MYA-1細胞由来のcDNAを発現するレトロウイルスライブラリーを作出した。新しく開発したPanning法とレトロウイルス発現クローニング法により、Petaluma株のEnvelopeに結合する分子のクローニングを行った。その結果、Petaluma株のEnvelopeに強く結合する分子(FIV Envelope Ligand ; FIEL)のクローニングに成功した。FIELの遺伝子配列を決定したところ、ヒトやマウスのCD134とホモロジーが高く、ネコのCD134ホモログであると考えられた。このFIEL分子発現プラスミドをCRFK細胞に導入したところ、通常CRFK細胞に感染しないTリンパ球指向性の株であるTM2株の感染に感受性となった。この結果は、FIEL分子がTリンパ球指向性の株がTリンパ球に感染する際の、主要な受容体となっていることを強く示唆する。FIEL分子はTリンパ球活性化抗原であることから、FIVがこの分子を受容体とすることで、ネコをエイズに誘導する可能性が示唆された。

The immune deficiency syndrome (FIV), the immune deficiency syndrome (SARS) guide, and the doctor's health care provider have major problems in bed. FIV is important because it is important to move things. In this study, antibodies and antibodies were used in this study. In this study, antibodies and antibodies were used in this study. In this study, antibodies, antibodies, antibody, antibody, antibody, The research results of this year are listed below. After FIV has been extracted from MYA-1 cells and mRNA cells have been extracted, cDNA cells have been synthesized and pMX cells have been introduced. The pMX has been introduced into the Plat-E cell, the Plat-E cell, the FuGene6 cell, the MYA-1 cell, the cDNA cell, the cell. The new Panning method can be used to determine whether or not to use this method, and the Petaluma Envelope method will be used in combination with molecular chemical analysis to improve the performance of the system. The results showed that the Petaluma strain Envelope strongly combined with the molecule (FIV Envelope Ligand; FIEL). The sub-column of the FIEL has decided that it is necessary to make sure that the CD134 is high, that the CD134 is not high, and that the test is not complete. The FIEL molecules show that the cells of CRFK cells are infected by bacteria. Usually, the cells of CRFK cells are infected by T cells, the cells are ball-directed, the strains of TM2 are infected, and the susceptibility is not affected. The results showed that the FIEL molecules showed the directivity of T cells to infect the cells, and the main recipients strongly indicated that they were infected. The activation antigens of FIEL molecules were activated by T molecules, the immunized antigens were activated by FIV molecules, the receptor molecules were activated by T molecules, and the possibility of receptor activation was indicated by the possibility of instigation.