ファージディスプレイ法を用いたネコ免疫不全ウイルスのレセプター群の解析

噬菌体展示法分析猫免疫缺陷病毒受体群

基本信息

批准号：
13760220
负责人：
宮沢孝幸
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ネコ免疫不全ウイルス(FIV)は、ネコに免疫不全を誘導し、獣医臨床上の大きな問題となっている。FIVとネコの系はヒトのエイズの動物モデルとしても重要である。本研究は、抗体ファージディスプレイ法を応用した新しいアプローチで、FIVのレセプター(群)を同定・解析することを目的とする。本年度の研究成果は以下の通りである。FIVのレセプターを発現するMYA-1細胞からmRNAを抽出後、cDNAを合成し、それをレトロウイルスベクター(pMX)に導入した。このpMXに導入したcDNAライブラリーを、Ecotropic-MuLVのパッケージング細胞であるPlat-E細胞にFuGene6でトランスフェクトすることにより、MYA-1細胞由来のcDNAを発現するレトロウイルスライブラリーを作出した。新しく開発したPanning法とレトロウイルス発現クローニング法により、Petaluma株のEnvelopeに結合する分子のクローニングを行った。その結果、Petaluma株のEnvelopeに強く結合する分子(FIV Envelope Ligand ; FIEL)のクローニングに成功した。FIELの遺伝子配列を決定したところ、ヒトやマウスのCD134とホモロジーが高く、ネコのCD134ホモログであると考えられた。このFIEL分子発現プラスミドをCRFK細胞に導入したところ、通常CRFK細胞に感染しないTリンパ球指向性の株であるTM2株の感染に感受性となった。この結果は、FIEL分子がTリンパ球指向性の株がTリンパ球に感染する際の、主要な受容体となっていることを強く示唆する。FIEL分子はTリンパ球活性化抗原であることから、FIVがこの分子を受容体とすることで、ネコをエイズに誘導する可能性が示唆された。

猫免疫缺陷病毒（FIV）诱导猫的免疫缺陷，从而引起主要的兽医临床问题。 FIV和CAT系统作为人类辅助动物模型也很重要。这项研究旨在使用使用抗体噬菌体显示方法的新方法来识别和分析FIV的受体（组）。今年研究的结果如下：从表达FIV受体的MyA-1细胞中提取mRNA后，将cDNA合成并引入逆转录病毒载体（PMX）。通过将引入该PMX引入的cDNA文库转染到Plat-E细胞中，这是一种用fugene6的生态 - 穆尔维的包装细胞，创建了从Mya-1细胞表达cDNA的逆转录病毒库。新开发的平移方法和逆转录病毒表达克隆方法用于克隆与叶质菌株包膜结合的分子。结果，我们成功克隆了一个强烈结合petaluma菌株（FIV包膜配体； FIEL）的分子。当确定FIEL的基因序列时，发现它是人和小鼠CD134的高同源物，被认为是CAT CD134同源物。当将表达FIEL分子的质粒引入CRFK细胞中时，它很容易感染TM2，TM2是一种T-Lymphocyte指导的菌株，通常不会感染CRFK细胞。该结果强烈表明，在感染T淋巴细胞时，FIEL分子是T淋巴细胞指导菌株的主要受体。由于菲尔分子是T淋巴细胞激活抗原，因此已经提出，FIV可以通过使用该分子作为受体来诱导猫来艾滋病。