权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

病原性コアラレトロウイルスの解明と制御へ向けての基礎研究

考拉致病性逆转录病毒的阐明和控制基础研究

基本信息

批准号：
22658094
负责人：
宮沢孝幸
金额：
$ 1.39万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

レトロウイルスはゲノムに組み込まれるという性質をもっており、ほ乳類のゲノムには意味のある遺伝子の何倍もの分量の「レトロウイルス」が生まれながらにして組み込まれている。この宿主のゲノムに入り込み宿主と同化したウイルスのことを内在性レトロウイルスと呼ぶ。ほ乳類のゲノムでは、遺伝子の占める割合がわずか2%程度である一方で、内在性レトロウイルスの配列が占める割合は約10%と非常に高い。最近の研究により、内在性レトロウイルスが、胎盤の形成や病原性ウイルスの防御に関わっていることが明らかになってきた。このことは、ほ乳類は生理学的機能の進化のためにレトロウイルスを積極的に取り込み(内在化)、利用してきたことを意味する。ところがコアラレトロウイルス(KoRV)は内在性レトロウイルスでありながら、病原性を保持しており、白血病や免疫不全などを引き起こしている。本研究では、KoRVを遺伝学的ならびに生物学的に解析し、病原性をもつ型(サブタイプ)を明らかにするとともに、KoRVの増殖を抑える抗ウイルス薬の探索を行うことを目的とした。本年度はこれまでの研究結果をもとに性質の異なるKoRVの感染性遺伝子クローンを作出した。それぞれの型に特異的なプライマーを設計し、忠実度の高いPCR用ポリメラーゼを用いてKoRV全長のcDNAを得た。得られたcDNAの塩基配列を決定しPCRによるエラーがないことを確認した後、ゲノムの両側にLTRをもつ感染性遺伝子クローンの形に組み直した。感染性遺伝子クローンのプラスミドをKoRVに感受性の細胞にトランスフェクトし、逆転写酵素活性、LacZマーカーレスキューアッセイ、イムノブロット法にて感染性を確認したところ、野生株と同様の感染性が確認できた。興味深いことにクローニングした感染性クローン由来のウイルスは、HEK293細胞では増殖したが、TE671細胞では増殖しなかった。

レトロウイルスはゲノムに组み込まれるという性をもっており、ほmilk typeのゲノムにはmeaningのある伝子の合ものComponentの「レトロウイルス」が生まれながらにして组み込まれている.このhostのゲノムに入り込みhostとassimilationしたウイルスのことを内性レトロウイルスとHUぶ.ほのゲノムでは, 伝子の肖める Cut and combine 2% level であるで, the internal nature of the レトロウイルスのalignment accounted for about 10% of the めるcut and combined は and was very high. Recent research on disease, intrinsic disease, and placental disease Original nature ウイルスの Defense に关わっていることが明らかになってきた.このことは、ほThe physiological functions of breast milkスをActive にtake り込み (internalization), use してきたことをmeaning する.ところがコアラレトロウイルス(KoRV)は内性レトロウイルスでありながら, pathogenic をmaintenance しており, leukemia やimmune insufficiency などをinduced こしている. This study is an analysis of the biology of KoRV's legacy and its pathogenic type.明らかにするとともに、KoRVのgrowth and reproductionを suppresses theえるantiウイルス薬のExplorationを行うことをpurposeとした. The results of this year's research on the nature of the research on the nature of KoRV's infectious disease were carried out. The specific なプライマーを design of the それぞれのにし, the high fidelity PCR ポリメラーゼを and the いてKoRV full-length cDNA were obtained. Determination of cDNA base alignment and confirmation of PCRた后、ゲノムの両lateralにLTRをもつInfectious legacy 伝子クローンのshapedにgroupみstraightした. Infectious disease クローンのプラスミドをKoRV sensitive cells にトランスフェクトし, inverse writing enzyme activity, LacZマーカーレスキューアッセイ, イムノブロット法にて infectivity を confirmed したところ, wild strain と様の infectivity が confirmed できた. H EK293 cells are not allowed to proliferate, and TE671 cells are not allowed to proliferate.