内在性ネコ白血病ウイルスを用いたネコ免疫不全ウイルスの感染防御に関する研究

利用内源性猫白血病病毒预防猫免疫缺陷病毒感染的研究

基本信息

批准号：
09760288
负责人：
宮沢孝幸
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は内在性ネコ白血病↓イルス(enFeLV)による外来性ネコ白血病ウイルスサブグループB(FeLV-B)に対する感染防御の機構を詳しく解析するとともに、そのenFeLVを利用して、ネコ免疫不全ウィルス(FIV)の感染を阻止する方法を確立することである。その目的に向かってまず1)enFeLVによるFeLV-Bの感染ブロックのメカニズムを詳細に解析し、2)FIVのレセプター結合部位を決定することとした。次いで、3)FIVレセブター結合部位をenFeLVのEnv蛋白に導入し、FIV感染ブロック能を賦与できるか、in vitroで検討する。さらに、4)そのリコンビナントenv遺伝子をウイルス系ベクターなどを利用して、ネコの細胞に導入することを目標とした。本年度は以下の研究をおこなった。enFeLV Env蛋白のGST fusion蛋白を大腸菌で大量発現し、精製後ウサギに免疫し、enFeLVのEnv蛋白を認識する抗体を得たが、本血清は外来性のFeLVにも交差反応性を示した。そのため、同蛋白をマウスに接種しモノクローナル抗体の作製を試みたが目的の抗体が得られなかったので、バキュウロウイルス発現系を用いて、enFeLV Env蛋白の発現を行いそれと合成ペプチドを免疫原にして、モノクローナル抗体の作成を現在行っている。バキュウロウイルス発現系で発現させたenFeLVのEnv蛋白により、FeLV-Bの感染がブロツクされる過程を解析した。また、リコンビナント蛋白を導入すべくベクターの開発をネコヘルペスウイルス1型(FHV-1)、ネコ巨細胞形成ウイルス(FSV)を用いて行っている。FHV-1に関してはgCプロモーターを用いて、FIVのenv遺伝子を高率に発現するりコンビナントウイルスの作製に成功した。

这项研究将通过内源性猫白血病↓ILSU（ENFELV）分析针对侵入性猫白血病病毒B（FELV-B）的感染保护机制，并建立了一种使用ENFELV来防止感染猫科免疫缺陷病毒（FIV）的方法。为了实现这一目标，我们首先决定对ENFELV的感染阻断FELV-B的机理进行详细分析，以及2）确定FIV的受体结合位点。接下来，3）将FIV受体结合位点引入ENFELV的ENV蛋白中，并在体外研究是否可以赋予FIV感染阻断能力。此外，目标是使用病毒载体等将重组ENV基因引入猫细胞。今年，我们进行了以下研究：ENFELV ENV蛋白在大肠杆菌中大量表达，纯化后，将兔子免疫以获得识别Enfelv Env蛋白的抗体，但该血清还显示出与外国FELV的交叉反应性。因此，我们试图用蛋白质接种小鼠以产生单克隆抗体，但是未获得感兴趣的抗体，因此我们目前正在通过使用bacurouroverovirus表达系统表达ENFELV ENV蛋白来创建单克隆抗体，并将其用作免疫原。 bacurovirus表达系统中ENFELV的酶蛋白阻止FELV-B感染的过程。此外，已经开发了使用猫疱疹病毒1型（FHV-1）和猫巨型细胞形成病毒（FSV）引入重组蛋白的媒介。关于FHV-1，我们成功地创建了一种组合病毒，该病毒使用GC启动子以高速率表达FIV的ENV基因。